上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時間:2017-06-08 13:22:37瀏覽次數(shù):319
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細胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0909
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞系來源于一重度少精癥男性患者的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;5-6天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY0909 實驗方法和步驟
(一) 前處理 用臺稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時后,將動物處死,用剪刀剪開皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點時間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細胞均勻分散,在酒精燈火焰上來回烤一下,以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項:
1.收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
物理性狀及指標:
水分:……………………≤0.2%
熔點:……………………87~91℃
灼燒殘渣:………………≤0.1%
含量:……………………≥99%
用途及描述:科研試劑,適用于 pH 6.2-7.8 范圍內(nèi)的液體。
儲存條件:18~25℃,避光防潮密閉干燥。
類別:免疫組化
中文名稱:0.1%液消化液
英文名字:0.1% Trypsin Solution
產(chǎn)品描述
抗原修復(fù)用于甲醛固定的石蠟包埋組織切片。石蠟切片標本用甲醛固定,使得細胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇,同時蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進行免疫組化染色時,需要行抗原修復(fù)或暴露,即將固定時分子之間所 形成的交聯(lián)破壞,而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。 酶消化方法是常用的抗原修復(fù)方法之一,常用 0.1%和 0.4%液。一般 說來,消化能力較弱,主要用于細胞內(nèi)抗原的消化,主要用于細 胞間抗原的消化。工作中要認真參照抗體說明書指示進行消化酶的選擇,這樣針對性更強,標記效果更理想。
產(chǎn)品優(yōu)勢
主要用于細胞內(nèi)抗原的消化,本產(chǎn)品具有方便快速、穩(wěn)定安全、細胞狀態(tài)好等特點。
儲存條件
-20℃
注意事項
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
中文名稱:AP標記抗體稀釋液
英文名字:AP標記抗體稀釋液
產(chǎn)品說明:
AP標記抗體稀釋液(AP-Antibody Dilution Buffer)適用于免疫組織化學(xué)與免疫印跡等實驗中AP標記抗體的稀釋。稀釋液中添加了抗體保護劑和穩(wěn)定劑等成分,有效增加了稀釋后AP標記抗體的穩(wěn)定性。用此稀釋液稀釋后的AP標記抗體可在2-8℃穩(wěn)定保存至少六個月。
使用方法:
按照一抗效價(或個人優(yōu)化條件),將適量抗體加入抗體稀釋液中即可。例如,效價為1:1000時,可將1ul抗體加入到1ml抗體稀釋液中,充分混勻后即可使用??贵w現(xiàn)用現(xiàn)稀釋,稀釋后的抗體可2-8℃保存。
注意事項:
如需抗體回收再利用,建議在2-8℃進行抗體的結(jié)合反應(yīng),以減緩抗體效價的衰減速度。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
儲存條件:
-20℃保存,有效期為 2 年。短期可 2-8℃保存
中文名稱:Bouin's脫鈣液
英文名字:bouin氏脫鈣液
產(chǎn)品介紹:
組織脫鈣,主要由PA、甲醛、甲酸等組成。
中文名稱:DAB顯色試劑盒(20×)
英文名字:DAB顯色試劑盒(20×)
產(chǎn)品簡介:
二氨基聯(lián)苯胺(Diaminobenzidine,DAB)是過氧化物酶(POD)的顯色底物,DAB顯色液主要用于免疫過氧化物酶法,適用于辣根過氧化物酶HRP標記的免疫印記或免疫組化反應(yīng)。過氧化物酶催化底物發(fā)生反應(yīng),于反應(yīng)部位產(chǎn)生棕色沉淀物。免疫印記可直接在膜上顯示條帶;免疫組化標本顯色時間一般為室溫5-20分鐘,隨后在