上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時(shí)間:2017-06-08 13:41:24瀏覽次數(shù):316
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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商,提供人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞;NTERA-2的報(bào)價(jià),咨詢,稱技術(shù)服務(wù),咨詢選購(gòu)。
細(xì)胞名稱 人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞;NTERA-2
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞是1980年從Tera-2細(xì)胞系的裸鼠異種移植瘤中分離建立的。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 該細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要維持較高的密度,T75瓶中至少接種5×106個(gè)細(xì)胞。每2~3天傳代1次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:10,12;D13S317:13;D16S539:11,12,13;D18S51:14;D19S433:14,15.2;D21S11:30,31;D2S1338:22,25;D3S1358:16;D5S818:9,12;D7S820:10,12;D8S1179:13,15;FGA:23;TH01:9.3;TPOX:8;vWA:18,19;
同工酶
染色體 62~67
使用權(quán)限 A類培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境:首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境,即對(duì)培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。
2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同,需要有葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。
3、溫度和pH:細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動(dòng)物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2~7.4。
4、氣體環(huán)境:培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2,O2是細(xì)胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
操作步驟:
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
凝膠類型:凝膠過濾填料,親脂型
結(jié)構(gòu)成分:交聯(lián)葡聚糖
粒徑: 100-200目
工作PH值:2-11
操作溫度:4-40℃
排阻極限:4~5KD(與所用溶劑有關(guān))
球蛋白分離范圍:100~4000
保存條件:4-25℃
中文名稱:瓊脂糖凝膠2B
英文名字:Sepharose 2B
性狀:白色微球, 無嗅、無味
凝膠類型:凝膠過濾填料,凝膠層析介質(zhì)
結(jié)構(gòu)成分:2%交聯(lián)度瓊脂糖
粒徑:60-200μm
工作PH值:4-9
操作溫度:4-40℃
分離范圍:70,000-40 ×106
保存條件:4-8℃
應(yīng)用:蛋白、大分子復(fù)合物、病毒、核酸、多糖的分離、分子量測(cè)定等
中文名稱:瓊脂糖凝膠4FF
英文名字:Sepharose 4FF
性狀:白色微球, 無嗅、無味
凝膠類型:凝膠過濾填料;快流速,物理與化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。
產(chǎn)品基質(zhì):4%瓊脂糖
粒徑:45-165μm
工作PH值:3-13
操作溫度:4-40℃
分離范圍:70,000-20 ×106
保存條件:4-8℃
應(yīng)用:巨大分子,病毒,疫苗的分離純化等
中文名稱:瓊脂糖凝膠6FF
英文名字:Sepharose 6FF
性狀:白色微球, 無嗅、無味
凝膠類型:凝膠過濾填料;快流速,物理與化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。
產(chǎn)品基質(zhì):6%瓊脂糖
粒徑:45-165μm
工作PH值:3-13
操作溫度:4-40℃
分離范圍:10,000-4 ×106
保存條件:4-8℃
應(yīng)用:巨大分子,病毒,疫苗的分離純化等
中文名稱:瓊脂糖凝膠CL-4B
英文名字:Sepharose CL-4B
性狀:白色微球, 無嗅、無味
凝膠類型:凝膠過濾填料;反復(fù)交聯(lián),化學(xué)與物理性質(zhì)更加穩(wěn)定。
結(jié)構(gòu)成分:6%交聯(lián)度瓊脂糖
粒徑:45-165μm
工作PH值:3-13
操作溫度:4-40℃
分離范圍:10,000-4 ×106
保存條件:4-8℃
應(yīng)用:蛋白、多肽、多糖的分離、分子量測(cè)定等
中文名稱:瓊脂糖凝膠CL-6B
英文名字:Sepharose CL-6B
性狀:白色微球,無嗅、無味
凝膠類型:凝膠過濾填料;反復(fù)交聯(lián),化學(xué)與物理性質(zhì)更加穩(wěn)定。
結(jié)構(gòu)成分:6%交聯(lián)度瓊脂糖
粒徑:45-165μm
工作PH值:3-13