上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品: 進(jìn)口elisa試劑盒,細(xì)胞株,細(xì)胞系,菌種 |
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公司信息
- 聯(lián)系人:
- 劉小姐
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- 上海市閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈
- 郵編:
- 200000
- 網(wǎng)址:
- www.bhsy-e.com/
參考價(jià) | ¥1248 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
10T | 1248元 | 15 盒 可售 |
更新時(shí)間:2024-01-09 15:46:47瀏覽次數(shù):146
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公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表達(dá)感受態(tài) | 10T | BJ-PJ6651 |
描述:BL21(DE3) Chaprone 感受態(tài)細(xì)胞中含有分子伴侶蛋 白質(zhì)粒,其表達(dá)產(chǎn)物可協(xié)助重組蛋白正確折疊形成可溶活性 蛋白。分子伴侶蛋白質(zhì)粒為抗性(chloramphenicol, Cmr)的表達(dá)受控于四環(huán)素(tetR)操縱子,因此該感受態(tài) 不適用于抗性表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。 本品使用 的化學(xué)感受態(tài)技術(shù)制備, 其室溫可保存 3 天、-20°C 可保存 2 年(推薦保存溫度)、 -80°C 可長期保存性能無下降。運(yùn)輸過程中無需干冰,可常 規(guī)冰袋運(yùn)輸(推薦運(yùn)輸溫度)。該感受態(tài)細(xì)胞為熱激感受態(tài) 細(xì)胞,轉(zhuǎn)用于蛋白表達(dá)(不可用于克隆和載體構(gòu)建),經(jīng) 42°C 熱激 1min 可獲得 105~106 cfu/μg 效價(jià),可滿足質(zhì)粒轉(zhuǎn)化要 求。該制品使用簡單、運(yùn)輸、儲存方便。
組分
RTS BL21(DE3)Chaprone Competent Cell(10T) 1 瓶
Nano E.coli Transfection Reagent 1 mL
儲存:RTS 系列感受態(tài)為干粉形式,均可室溫保存 3 天,長期保存-20°C(2 年)。經(jīng) Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受態(tài)必須分裝后,并于-60°C 以下保存。溶解后的感受態(tài)細(xì)胞避免反復(fù)凍融,在-60°C 以下可保存 6 個月。
操作方法
1. 從-20°C 冰箱中取出 Nano E.coli Transfection Reagent融化,放置于冰上。取 300 μl Nano E.coli TransfectionReagent 加入到一支凍干感受態(tài)細(xì)胞中,并分裝到 10 支 1.5ml EP 管中(每支 30 μl),于-60°C 以下保存(或立即使用)。
2. 將 10~100 ng 質(zhì)粒 DNA(不可使用連接產(chǎn)物、不可使用篩選標(biāo)記質(zhì)粒)加入到分裝的感受態(tài)細(xì)胞中,輕彈EP 管(或槍頭輕輕吹打),置于冰上 15min。
3. 置于 42°C 熱激 1 min 后,迅速置于冰上急冷 2 min。
4. 熱激完畢后,向上述感受態(tài)細(xì)胞中加入 450 μL 不含抗生素的 SOC(或 LB)培養(yǎng)基,37 °C 振蕩(225 rpm)培養(yǎng)60 min。使質(zhì)粒上抗性標(biāo)記基因表達(dá),菌體復(fù)蘇。
5. 取200 μl復(fù)蘇菌液涂布到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板表面。(含相應(yīng)質(zhì)粒抗生素和 20 μg/ml )
6. 將平板置于 37 °C 培養(yǎng),12~18 小時(shí)后可出現(xiàn)菌落。
7. 挑選生長良好的菌落,接入 LB 培養(yǎng)基(含相應(yīng)質(zhì)??股?,20 μg/ml),37 ℃劇烈振蕩培養(yǎng)過夜。
8. 1/50 比例接入新的 LB 培養(yǎng)基(含相應(yīng)質(zhì)粒抗生素,20μg/ml ,0.5 mg/ml L-阿拉伯糖)37 ℃劇烈振蕩培養(yǎng)至菌體密度 OD600 約 0.3(約 2h)。
9. 加入終濃度 2 ng/ml 四環(huán)素(誘導(dǎo) chaprone 伴侶蛋白表達(dá)),37℃劇烈振蕩培養(yǎng)至 OD600 約 0.5(約 2~4h)。
10. 加入適量 IPTG(0.1-1 mM), 15℃振蕩培養(yǎng) 24h(培養(yǎng)搖床無法制冷條件下,室溫誘導(dǎo) 8~12h)。
11. 4,000 rpm 室溫離心 15 min,收集細(xì)胞,進(jìn)行蛋白表達(dá)和可溶性表達(dá)分析。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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