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上海博湖生物科技有限公司
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更新時間：2023-10-26 20:10:05瀏覽次數(shù)：618
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Ar 1193 電感受態(tài)細胞50ul*10 操作方法（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨毎麘乙悍盅b到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態(tài)細胞為例。
Ar 1193 電感受態(tài)細胞50ul*102 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細胞冷卻2-3 分鐘，該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
Ar 1193 電感受態(tài)細胞50ul*105 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞加到含相應抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時。
● 涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項
1. 感受態(tài)細胞應保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進行轉(zhuǎn)化操作時，應根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關產(chǎn)品：
Thymosin α1 犬α1 規(guī)格： 48T/96T
ICAM-1/CD54 犬細胞間粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T
VK1 犬1 規(guī)格： 48T/96T
VE 犬 規(guī)格： 48T/96T
VA 犬 規(guī)格： 48T/96T
DHT 犬雙氫睪酮 規(guī)格： 48T/96T
RBP 犬結(jié)合蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Renin 犬腎素 規(guī)格： 48T/96T
ADM 犬腎上腺髓質(zhì)素 規(guī)格： 48T/96T
T3 犬*狀腺原氨酸 規(guī)格： 48T/96T
PSA 犬前列腺特異性抗原 規(guī)格： 48T/96T
eNOS 犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 規(guī)格： 48T/96T
ET-1 犬內(nèi)皮素1 規(guī)格： 48T/96T
ET-1 犬內(nèi)皮素1 規(guī)格： 48T/96T
IgE 犬免疫球蛋白E 規(guī)格： 48T/96T
Des 犬結(jié)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
T4 犬甲狀腺素 規(guī)格： 48T/96T
MYO/MB 犬肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T
MYO/MB 犬肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Tn-Ⅰ 犬肌鈣蛋白Ⅰ 規(guī)格： 48T/96T
EPO 犬紅細胞生成素 規(guī)格： 48T/96T
OPN 犬骨橋素 規(guī)格： 48T/96T
T 犬睪酮 規(guī)格： 48T/96T
HCⅡ 犬肝素輔因子Ⅱ 規(guī)格： 48T/96T
FSH 犬促卵泡素 規(guī)格： 48T/96T
LH 犬促黃體生成激素 規(guī)格： 48T/96T
E 犬雌激素 規(guī)格： 48T/96T
E2 犬雌二醇 規(guī)格： 48T/96T
CD8 犬白細胞分化抗原8 規(guī)格： 48T/96T
CD6 犬白細胞分化抗原6 規(guī)格： 48T/96T
IL-6 犬白介素6 規(guī)格： 48T/96T
IL-4 犬白介素4 規(guī)格： 48T/96T
IL-2 犬白介素2 規(guī)格： 48T/96T
IL-18 犬白介素18 規(guī)格： 48T/96T
IFN-γ 犬γ干擾素 規(guī)格： 48T/96T
GABA 犬γ氨基丁酸 規(guī)格： 48T/96T
β-EP 犬β內(nèi)啡肽 規(guī)格： 48T/96T
IFN-α 犬α干擾素 規(guī)格： 48T/96T
5-HT 犬5羥色胺 規(guī)格： 48T/96T
2,3-DPG 犬2,3-二磷酸甘油酸 規(guī)格： 48T/96T
AE 禽腦脊髓炎 規(guī)格： 48T/96T
Ar 1193 電感受態(tài)細胞50ul*10MHC/BoLA 牛主要組織相容性復合體 規(guī)格： 48T/96T
PROG 牛孕激素/孕酮 規(guī)格： 48T/96T
ACAC 牛乙酰乙酸檢測 規(guī)格： 48T/96T
