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上海博湖生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高密度脂蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒,同型半胱氨酸ELISA檢測(cè)試劑盒,游離脂肪酸ELISA檢測(cè)試劑盒 |
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ATCC15834 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50 操作方法（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
ATCC15834 感受態(tài)細(xì)胞100ul*502 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無(wú)菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)（160-220 轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
ATCC15834 感受態(tài)細(xì)胞100ul*505 將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過(guò)離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃，不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品：
Sag 人超抗原 規(guī)格： 48T/96T
iFABP 人腸脂肪酸結(jié)合蛋白 規(guī)格： 48T/96T
Enterovirus 人腸病毒 規(guī)格： 48T/96T
LATS 人甲狀腺刺激素 規(guī)格： 48T/96T
OPAs 人不透光相關(guān)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
LTB 人不耐熱腸毒素B亞單位 規(guī)格： 48T/96T
LTB 人不耐熱腸毒素B亞單位 規(guī)格： 48T/96T
ADMA 人不對(duì)稱(chēng)二甲基 規(guī)格： 48T/96T
ADMA 人不對(duì)稱(chēng)二甲基 規(guī)格： 48T/96T
CFH 人補(bǔ)體因子H 規(guī)格： 48T/96T
C5b 人補(bǔ)體片斷5b 規(guī)格： 48T/96T
C5b 人補(bǔ)體片斷5b 規(guī)格： 48T/96T
C5a 人補(bǔ)體片斷5a 規(guī)格： 48T/96T
C4b 人補(bǔ)體片斷4b 規(guī)格： 48T/96T
C4b 人補(bǔ)體片斷4b 規(guī)格： 48T/96T
C3b 人補(bǔ)體片斷3b 規(guī)格： 48T/96T
C3b 人補(bǔ)體片斷3b 規(guī)格： 48T/96T
C3a 人補(bǔ)體片斷3a 規(guī)格： 48T/96T
C3bR 人補(bǔ)體片段3b受體 規(guī)格： 48T/96T
CCP 人補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格： 48T/96T
C4 人補(bǔ)體蛋白4 規(guī)格： 48T/96T
C3 人補(bǔ)體蛋白3 規(guī)格： 48T/96T
C7 人補(bǔ)體7 規(guī)格： 48T/96T
C3SP 人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物 規(guī)格： 48T/96T
C1INH 人補(bǔ)體1抑制物抗體 規(guī)格： 48T/96T
VN/CD51+CD61 人玻連蛋白/體外粘連蛋白 規(guī)格： 48T/96T
VIM 人波形蛋白 規(guī)格： 48T/96T
HCV-IgM 人丙型肝炎IgM 規(guī)格： 48T/96T
HCV-IgG 人丙型肝炎IgG 規(guī)格： 48T/96T
M2-PK 人丙酮酸激酶M2型同工酶 規(guī)格： 48T/96T
PK 人丙酮酸激酶 規(guī)格： 48T/96T
MDA 人丙二醛 規(guī)格： 48T/96T
ALT/GPT 人轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶 規(guī)格： 48T/96T
CAPF 人表皮細(xì)胞活化肽因子 規(guī)格： 48T/96T
EGF 人表皮生長(zhǎng)因子 規(guī)格： 48T/96T
ATCC15834 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50 EK 人表皮角蛋白 規(guī)格： 48T/96T
mIgM 人表面膜免疫球蛋白M 規(guī)格： 48T/96T
mIgD 人表面膜免疫球蛋白D 規(guī)格： 48T/96T
mIgA 人表面膜免疫球蛋白A 規(guī)格： 48T/96T
SP-D 人表面活性蛋白D 規(guī)格： 48T/96T
SP-A 人表面活性蛋白A 規(guī)格： 48T/96T
