| 上海宇淳生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥ 3095 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號(hào) 1003
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間：2019-05-14 13:15:04瀏覽次數(shù)：824
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Super Fluor 488
Super Fluor 488
| 5 mg | ￥3,095 |
| 25 mg | ￥6,200 |
一．實(shí)驗(yàn)步驟
1.1 蛋白溶解：用0.1 M NaHCO3 溶解至終濃度為2mg/mL
將1mL 去離子水加入84mg NaHCO3 瓶中，配成1M 的碳酸氫鈉溶液。振蕩或吹打至*溶解。該溶液pH 約8.3，2～6℃保存可用2個(gè)星期；若抗體是溶液，將抗體稀釋至2mg/mL，再加入1/10 體積的上述碳酸氫鈉溶液；若抗體是凍干粉，將1M 碳酸氫鈉溶液用10 倍去離子水稀釋成0.1M 后，用其將抗體溶成2mg/mL 的溶液。
1.2 染料溶解：染料固體粉末從冰箱放入干燥器中慢慢升至常溫后，用無水DMSO將染料配置濃度為1 mg/mL。
1.3 標(biāo)記：在1mL蛋白溶液中緩慢加入適量染料溶液，（蛋白:染料摩爾比=1:20～50；質(zhì)量比可在以下范圍內(nèi)優(yōu)化 10～200ug Super dye每毫克IgG抗體）。同時(shí)在暗處常溫緩慢攪拌1小時(shí)。也可以直接將蛋白溶液直接加入染料的固體粉末的試劑瓶中，同時(shí)在暗處常溫緩慢攪拌1小時(shí)。
1.4 純化：選擇下面三種方式純化后，產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM 溶液中，-20℃避光儲(chǔ)存。
1.4.1 透析法：
1）簡(jiǎn)單純化可用100 mL 0.15 M NaCl 溶液常溫避光透析4次,每次4小時(shí)除去未標(biāo)記上的染料。
2）在4°C用新鮮的1 L 0.15 M NaCl 溶液再避光透析過夜。
3）用100 mL 0.01 M PBS/ 0.01% 溶液常溫避光透析4小時(shí), 在4°C常溫避光再次透析過夜。
4）用0.22 μm注射器過濾頭過濾抗體溶液。
1.4.2 P-30柱子
1）0.5g p-30凝膠加入9mLPBS（pH=7.4）室溫過夜放置；次日，棄上清；真空抽濾5min。
2）加入9mLPBS，輕柔震蕩均勻，放置20min后，去除上清液。
3）再重復(fù)2）。
4）將樹脂柱放入一個(gè)13×100mm 的玻璃管柱中，每個(gè)柱子加入1.5mL（不要多加），填的要均勻不能有氣泡。具體方法是：攪動(dòng)純化樹脂（組分C），加入1.0mL 懸浮液至空柱中靜置；全部下沉后再加入0.5mL樹脂至床體積為～1.5mL蓋上蓋子，可以室溫保存。
5) 將樹脂柱上下端的口打開，放入10mL離心管中由于重力水自然流下，用垂直轉(zhuǎn)子1100g 離心3min，rpm 與相對(duì)離心力g 的換算公式如下：相對(duì)離心力g=(1.12×10-5)(rpm)2(半徑cm)；離心后靜置待緩沖液全部流出，棄去緩沖液，保留收集管（若沒有垂直轉(zhuǎn)子，角轉(zhuǎn)子也可）。
6) 換上干凈的離心管，將標(biāo)記的蛋白反應(yīng)液200μL逐滴加入樹脂柱的中心部位，使溶液被吸入膠床中；
7) 將樹脂柱放入空的收集管中，1100g 離心5min；
8）離心后，收集管內(nèi)是標(biāo)記好的蛋白，溶在100μLPBS 中，pH7.2，包括2mM 的疊氮鈉。未結(jié)合的染料保留在柱中，棄去樹脂柱。
注意事項(xiàng)：配置柱子時(shí)，用較細(xì)的小瓶，每個(gè)小瓶配置2個(gè)柱子。便于去除水分。填柱子時(shí)，加到1.5mL，盡量不要多加，離心時(shí)間按照說明書1000g/3min，不要隨便更改。
