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南京億迅生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 質(zhì)控樣品,人工血清,人工胃液,elisa試劑盒,化學(xué)試劑,生物試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥ 670 | ￥ 500 |
| 訂貨量 | 1件 | 5件 |
- 型號(hào)
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- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 南京市
更新時(shí)間：2019-11-07 14:57:58瀏覽次數(shù)：474
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己糖激酶(HK)檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體30mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：液體30mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體5 mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存，臨用前加入4mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前每支加入2mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前每支加入250μL試劑一和250μL雙蒸水充分溶解備用，用不完的試劑4℃保存；
樣本的前處理
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備
收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 |
試劑一 | 400 |
試劑二 | 400 |
試劑三 | 80 |
試劑四 | 80 |
試劑五 | 40 |
試劑六 | 8 |
樣本 | 30 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在340 nm波長(zhǎng)下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1，比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴中，準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘。迅速取出比色皿并擦干，340 nm下比色，記錄5分20秒時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
注意事項(xiàng)
1、實(shí)驗(yàn)前，將試劑一、二、三37℃或25℃預(yù)熱10分鐘，之后37℃或25℃室溫放置。試劑四、五、六和樣本在冰上放置，以免變性和失活。
2、如果一次性測(cè)定樣本數(shù)較多，可將試劑一、二、三、四、五和六按比例配成混合液。
2、不同勻漿組織中HK活力不一樣，做正式試驗(yàn)之前請(qǐng)做1-2只預(yù)試，若A2-A1>1，則說(shuō)明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液，使A2-A1<1，以提高檢測(cè)靈敏度。
3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
4、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
己糖激酶(HK)檢測(cè)試劑盒
