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當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>糖原合成酶(GCS)試劑盒微量法測定步驟
糖原合成酶(Glycogen synthase,GCS)試劑盒測定原理:GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UDP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映GCS活性。
測定步驟:
1、 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 工作液的配制:臨用前將試劑三和試劑四轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
3、 試劑五的配制:臨用前在試劑五中加入1mL試劑二充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
4、 將工作液和試劑五置于37℃預(yù)熱5分鐘。
5、 在1mL微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑五和180μL工作液,立即混勻,記錄340nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2,計算ΔA=A1-A2。
注意:在該試劑盒中,若ΔA大于0.1,需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測定,使ΔA小于0.1可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
測定意義:
GCS(EC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,以α-1,4-糖苷鍵相連延長糖鏈,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰島素作用的主要靶酶,對糖代謝的調(diào)節(jié)和血糖穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。
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