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培養(yǎng)基特點:
培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時間的貯存,必須放在2~6℃的冰箱內(nèi)。由于液體培養(yǎng)基不易保管,現(xiàn)在均改制成粉末。
培養(yǎng)基操作程序:
1. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。
2. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。。
3. 取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
4.測定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
5.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
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