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當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>抗體的過(guò)程方法
原理:
B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對(duì)這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細(xì)胞的這種能力和量是有限的,不可能持續(xù)分化增殖下去,因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞,再進(jìn)一步克隆化,這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤細(xì)胞的無(wú)限分裂的能力,又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力。將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠腹水內(nèi)即可獲得大量的高效、單一的特異性抗體。這種技術(shù)即稱(chēng)為單克隆抗體技術(shù)。
過(guò)程
1、免疫脾細(xì)胞的制備 制備單克隆抗體的動(dòng)物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。免疫方法同一般血清的制備,也可采用脾內(nèi)直接免疫法。
2、骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選 在融合前,骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)經(jīng)過(guò)含8-AG的培養(yǎng)基篩選,防止細(xì)胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的活性(恢復(fù)HGPRT的活性的細(xì)胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活)。骨髓瘤細(xì)胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),融合前24h換液一次,使骨髓瘤細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生。
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