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大鼠直腸組織提取物【Rat Intestine: Normal Rectal Derivatives】
直腸并不直,在矢狀面上有骶曲和會陰曲兩個彎曲,骶曲是直腸上段在骶、尾骨前面下降,形成凸向后的彎曲;會陰曲是直腸尾端繞過尾骨尖,形成凸向前的彎曲。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠直腸組織中高質量的總RNA,PCR準備的條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠直腸組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產品名稱 | 大鼠直腸組織提取物 |
規(guī)格 | 詳見說明書 |
貨號 | XG-X7059 |
培養(yǎng)步驟:
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
Fluoxetine Related CoMpound A;N-Methyl-3-phenyl-3-[(alpha,alpha,alpha-(trifluoro-M-tolyl)oxy]propylaMine Hydrochloride萊姆病螺旋體抗體anti- NGFRAP1 antibody纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Fluoxetine Related CoMpound B;N-Methyl-3-phenylpropylaMine成熟相關蛋白BOULE抗體anti- NGRN antibody纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Flurandrenolide伸長因子結合蛋白抗體anti- NGX6 antibody纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Flurbiprofen睪特異性性蛋白Y2抗體anti- NHE8 antibody細胞間粘附分子3(ICAM3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Fluticasone propionate(100Mg)乳腺癌易感基因2相關蛋白抗體anti- NHEDC2 antibody細胞間粘附分子2(ICAM2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Furazolidone酸化乳腺癌易感基因1抗體anti- NHLRC1 antibody細胞間粘附分子2(ICAM2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Gabapentin Related CoMpound B;(1-cyanocyclohexyl)acetic acid酸化上皮鈣粘附分子抗體anti- NHP2 antibody細胞間粘附分子2(ICAM2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
Gabapentin Related CoMpound D;(1-(3-oxo-2-aza-spiro[4.5]dec-2-ylMethyl)-cyclohexyl)acetic acidBRD2蛋白抗體anti- NHP2L1 antibody神經元特異性烯醇化酶(NSE)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)
大鼠直腸組織提取物L-Cysteine Hydrochloride, Monohydrate L-半鹽酸鹽一水 中心粒周蛋白抗體Human NDUFS8(NADH dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur protein 8, mitochondrial) ELISA Kit血管緊張素Ⅱ受體2抗體試劑盒
L-Cysteine L-半 雄激素誘導增殖抑制蛋白抗體Human NDUFS7(NADH dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur protein 7, mitochondrial) ELISA Kit血管緊張素Ⅱ受體2試劑盒
L-Arginine L-蛋白酶體PSMβ3抗體Human CXCL14(C-X-C motif chemokine 14) ELISA Kit血管緊張素Ⅱ受體1抗體試劑盒
L-Arginine Monohydrochloride L-鹽酸鹽蛋白酶體PSMβ6抗體Human NR3C1(Glucocorticoid receptor) ELISA Kit血管緊張素Ⅱ受體1試劑盒
L-Aspartic Acid L-天蛋白酶體PSMβ7抗體Human PTMA(Prothymosin alpha) ELISA Kit血管緊張素Ⅱ試劑盒
L-Cystine L-酸化抗體Human DSCR6(Protein ripply3) ELISA Kit血管緊張素Ⅱ試劑盒
L-Glutamic Acid L-酸化p53結合蛋白1抗體Human CYP2C9(Cytochrome P450 2C9) ELISA Kit血管緊張素Ⅰ轉化酶試劑盒
L-Phenylalanine L-苯氨酸3酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體Human GOT2(Aspartate aminotransferase, mitochondrial) ELISA Kit血管緊張素Ⅰ受體抗體試劑盒
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