人體腎癌組織源提取物【Cancer: Human Kidney Cancer Derivatives】
腎癌是發(fā)生于腎臟的癌病類疾病，又稱腎細(xì)胞癌，腎腺癌，起源于腎小管上皮細(xì)胞，可發(fā)生于腎實(shí)質(zhì)的任何部位，可分為普通型（透明細(xì)胞）腎癌、頭狀癌和嫌色細(xì)胞癌。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體腎癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人體腎癌組織源提取物組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

10-(2,5-Dihydroxyphenyl)-10H-9-oxa-10-phospha-phenantbrene-10-oxide脂肪酰家族成員1抗體anti- MMP3 antibody載脂蛋白C1(APOC1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

TREHALOSEA2LD1蛋白抗體anti- MMP7 antibody麥芽糖酶糖化酶(MGA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Sodium perchlorateα1,4-N-酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體anti- MMP8 antibodyⅡ型前膠原羧基端原肽(PⅡCP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

CHROMIUM(II) CHLORIDE芳香酰胺脫?；缚贵wanti- MMP9 antibody膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Lithium bromide芳香酰胺脫酰基酶樣蛋白4抗體anti- MMS19 antibodyβ2-微球蛋白(β2M)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Cupric acetate氨基二酸半醛脫酶酸泛酰巰基胺轉(zhuǎn)移酶抗體anti- MMS19 antibody轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Zinc acetate賴氨酸酮戊二酸還原酶抗體anti- MMS2 antibody著絲粒蛋白H(CENPH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Perfluoropropionic anhydride錨蛋白重復(fù)域6抗體anti- MN1 antibodyT-細(xì)胞激活連接蛋白(LAT)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

人體腎癌組織源提取物Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..NADH脫酶黃素蛋白2抗體Human NMT1(Glycylpeptide N-tetradecanoyltransferase 1) ELISA Kit腦蛋白44樣蛋白(BRP44L)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

freeze-dried 1.0 mL聽NADH還原酶輔酶1抗體Human NTs(Neurotensin) ELISA Kitγ-分泌激活蛋白(γSAP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子1抗體Human ZIP4 ELISA Kit淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1(APLP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hanse ..線粒體復(fù)合物NDUFS3蛋白抗體Human L1CAM(Neural cell adhesion molecule L1) ELISA Kit免疫球蛋白G2α(IgG2α)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human lungNADPH酶2抗體Human ZMYND8(Zinc finger MYND domain-containing protein 8) ELISA Kit淀粉樣蛋白β前體樣蛋白1(APLP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Ganoderma meredithae Adaskaveg et GilbertsonNADPH酶活化蛋白1抗體Human PCGF6(Polycomb group RING finger protein 6) ELISA Kit沉默調(diào)節(jié)蛋白6(SIRT6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Homo sapiens, human利鈉肽受體B抗體Human TYR(Tyrosinase) ELISA KitN-基-D-天氡氨酸離子能受體2D(GRIN2D)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

Saprolegnia delica Coker利鈉肽受體C抗體Human PRDX3(Thioredoxin-dependent peroxide reductase, mitochondrial) ELISA Kit硬脂酰去飽和酶(SCD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。