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ROS活性氧檢測
簡介:
活性氧(Reactive?oxygen?species,?ROS)?包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，參與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。DHE活性氧檢測試劑盒是一種利用熒光探針DHE(Dihydroethidium)進(jìn)行活性氧檢測的,DHE可自由透過活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并被細(xì)胞內(nèi)的ROS氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可摻入染色體DNA中，產(chǎn)生紅色熒光。根據(jù)活細(xì)胞中紅色熒光的產(chǎn)生，可以判斷細(xì)胞ROS含量的多少和變化。二氫乙啶在細(xì)胞內(nèi)主要被超氧陰離子型ROS氧化，用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察，是一種快速簡便的組織或培養(yǎng)活細(xì)胞中ROS經(jīng)典檢測方法。
在激發(fā)波長535nm，發(fā)射波長610?nm附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測熒光，從而測定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。
ROS活性氧檢測
DHE探針標(biāo)記：??
1、?DHE溶液可在新鮮培養(yǎng)液、緩沖鹽溶液或組織灌流液中稀釋到所需濃度，100-1000倍稀釋，以此染色液更換細(xì)胞培養(yǎng)液或灌流液；也可直接向細(xì)胞孵育液體或灌流液中加入DHE探針溶液至所需濃度。
2、?依據(jù)細(xì)胞ROS含量的不同，DHE終濃度可選擇在100-1000倍稀釋的范圍，孵育
時間可選擇10-90?分鐘，在37℃或室溫進(jìn)行避光孵育。
3、 孵育結(jié)束后,用新鮮溶液清洗細(xì)胞或組織.
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