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       病毒滅活檢測(cè)病毒是一種個(gè)體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，只含一種核酸（DNA或RNA），必須在活細(xì)胞內(nèi)寄生并以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型生物。

       病毒是一種非細(xì)胞生命形態(tài)，它由一個(gè)核酸長(zhǎng)鏈和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成，病毒沒有自己的代謝機(jī)構(gòu)，沒有酶系統(tǒng)。因此病毒離開了宿主細(xì)胞，就成了沒有任何生命活動(dòng)、也不能獨(dú)立自我繁殖的化學(xué)物質(zhì)。它的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、和轉(zhuǎn)譯的能力都是在宿主細(xì)胞中進(jìn)行，當(dāng)它進(jìn)入宿主細(xì)胞后，它就可以利用細(xì)胞中的物質(zhì)和能量完成生命活動(dòng)，按照它自己的核酸所包含的遺傳信息產(chǎn)生和它一樣的新一代病毒。

       病毒滅活檢測(cè)病毒是一種可以在其它生物體間傳播并感染生物體的微小生物（其實(shí)因?yàn)椴《颈旧聿荒苓M(jìn)行新陳代謝，所以某種程度上還不能說(shuō)病毒是生物）。有時(shí)使用“病毒”描述那些在真核生物中傳播和感染的生物；使用“噬菌體”或“吞噬體”來(lái)描述那些在原核生物間傳播的生物。

       滅菌：是指用物理或化學(xué)的方法殺滅全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，使之達(dá)到無(wú)菌保障水平。經(jīng)過滅菌處理后，未被污染的物品，稱無(wú)菌物品。經(jīng)過滅菌處理后，未被污染的區(qū)域，稱為無(wú)菌區(qū)域。

       消毒：消毒是指殺死病原微生物、但不一定能殺死細(xì)菌芽孢的方法。通常用化學(xué)的方法來(lái)達(dá)到消毒的作用。用于消毒的化學(xué)藥物叫做消毒劑。

       通過上面的兩個(gè)概念你可以知道無(wú)論是細(xì)菌還是病毒在滅菌操作下都會(huì)被殺死，滅菌操作下除部分細(xì)菌的芽孢基本微生物都可以殺滅，不過也根據(jù)消毒液使用的不同或者微生物的耐受不同而效果不同。

 　　病毒滅活試驗(yàn)是利用某種有代表性的活病毒及其細(xì)胞感染技術(shù)，評(píng)價(jià)各種消毒因子的病毒殺滅效果，驗(yàn)證消毒因子的病毒滅活能力。

　　病毒滅活檢測(cè)，首先需要根據(jù)具體的產(chǎn)品具體的病毒滅活分析，病毒滅活效果驗(yàn)證，要找專業(yè)可靠具備CMA資質(zhì)認(rèn)證的病毒殺滅試驗(yàn)檢測(cè)中心機(jī)構(gòu)--廣州市微生物研究所有限公司。

       病毒殺滅效果試驗(yàn)，主要適用于消毒產(chǎn)品鑒定或日常監(jiān)測(cè)。用具有一定代表性的、活的病毒及其細(xì)胞感染技術(shù)，評(píng)價(jià)各種用途的消毒因子對(duì)測(cè)試病毒的殺滅效果。按此方法進(jìn)行的試驗(yàn)，只是對(duì)消毒因子的滅活病毒能力的重要方面進(jìn)行驗(yàn)證。

       具體的病毒殺滅試驗(yàn)檢測(cè)，不同的檢測(cè)單位機(jī)構(gòu)，收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)不同。不同的病毒殺滅驗(yàn)證，收費(fèi)要求也會(huì)不同。本公司通過實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定，具備CMA及CNAS資質(zhì)認(rèn)證，能夠嚴(yán)格按照病毒滅活驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)方法，進(jìn)行試驗(yàn)檢測(cè)，出具可靠的CMA報(bào)告。

    病毒失去感染性，稱為滅活。了解滅活的條件不僅對(duì)從患者分離病毒、防腐和消毒是必要的，而且和疫苗生產(chǎn)也有關(guān)系。病毒滅活的機(jī)理有三。

        一、破壞包膜：包膜含有脂類物質(zhì)，因之有包膜的病毒可迅速被脂溶劑破壞，如乙醚或去氧膽酸鈉可使病毒滅活。實(shí)際上可利用病毒對(duì)脂溶劑的敏感性來(lái)檢查病毒是否有包膜。物理因子，如滲透壓改變、凍融、熱和干燥等都可引起包膜破壞。一般認(rèn)為，呼吸道感染的病毒對(duì)于燥抵抗力弱，傳播主要是人間直接感染，這是因?yàn)橛邪さ脑省?br />
       二、病毒蛋白質(zhì)變性：能使蛋白質(zhì)變性的化學(xué)制劑都能使病毒滅活，加熱引起變性也是有效滅活的方法。一般說(shuō)病毒對(duì)熱抵抗力弱，60℃幾分鐘就使之感染性明顯降低，因此在分離病毒時(shí)，從患者取來(lái)的標(biāo)本需低溫保存，迅速送往實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)期保存要置于-80℃以下的低溫條件。

        三、病毒核酸的損害：X線、γ線等電離輻射可切斷核酸，紫外線可使核苷酸鏈上相鄰的嘧啶堿基形成二聚物，而破壞病毒基因的功能。另外吖啶橙或中性紅等染料可與病毒核酸結(jié)合，暴露于光線之下，可使核酸分解，而使病毒滅活。

　　近年來(lái)，隨著單抗市場(chǎng)在國(guó)內(nèi)的興起，對(duì)病毒清除技術(shù)（滅活和去除）的驗(yàn)證也提出了更高的要求，從最初的低pH孵育到最近幾年除病毒膜過濾技術(shù)在病毒清除方面的成熟的應(yīng)用，包括層析技術(shù)也逐漸被大家重視，從而進(jìn)一步提高下游工藝對(duì)于病毒的總的對(duì)數(shù)清除率。

　　在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，不管是哪種病毒清除技術(shù)，都是通過人為挑戰(zhàn)病毒，然后采用感染力或者其他適合的分析方法來(lái)估測(cè)樣品中的病毒滴度，然后測(cè)量出該步驟的病毒對(duì)數(shù)清除率，因此選擇一種合適的病毒滅活檢測(cè)分析方法對(duì)于病毒對(duì)數(shù)清除率的計(jì)算非常重要。

　　在病毒清除驗(yàn)證中，病毒的檢測(cè)分為三種情況：

　　1、根據(jù)病毒的感染性來(lái)定量病毒的滴度，有兩種方法，一稱為病毒空斑形成實(shí)驗(yàn)。二稱作TCID50半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物感染量實(shí)驗(yàn)，這種檢測(cè)方法是以細(xì)胞培養(yǎng)物中產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)（Cyto-pathic Effect，CPE）為基礎(chǔ)的檢測(cè)手段。

　　2、定量PCR的方法，盡管空斑形成和TCID50這兩種以細(xì)胞為基礎(chǔ)的感染性分析被視為病毒清除研究中的估測(cè)病毒滴度的金標(biāo)準(zhǔn)，qPCR方法已經(jīng)被迅速接受為病毒清除研究中估測(cè)病毒粒子的替代和補(bǔ)充方法。

　　3、直接用電子顯微鏡來(lái)計(jì)數(shù)病毒數(shù)目，但是由于該方法不能區(qū)分感染性病毒顆粒與非感染性病毒顆粒，因此無(wú)法判斷病毒的感染力，主要用于細(xì)胞發(fā)酵液的病毒初始量的計(jì)算中，因此著重介紹空斑形成實(shí)驗(yàn)，TCID50實(shí)驗(yàn)和qPCR三種檢測(cè)方法。

 　　一、病毒培育與滅活實(shí)驗(yàn)

　　1. 實(shí)驗(yàn)材料

　　實(shí)驗(yàn)用病毒株，宿主細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)瓶與 96 孔培養(yǎng)板，恒溫水 浴箱，二氧化碳培養(yǎng)箱，層流超凈工作臺(tái)，-80℃低溫箱，二氧化碳培養(yǎng)箱，液氮，離心設(shè)備，移液器，細(xì)胞維持培養(yǎng)基，細(xì)胞*培養(yǎng)基，去離子水等。

　　2.實(shí)驗(yàn)過程

　　病毒懸液制備：實(shí)驗(yàn)組，陽(yáng)性對(duì)照組，陰性對(duì)照組。病毒培育需每日觀察細(xì)胞與宿主細(xì)胞生長(zhǎng)情況，接種細(xì)胞，病變收獲病毒， 每組按照特定條件設(shè)置病毒滅殺實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，并每組進(jìn)行噬斑病毒感染滴度測(cè)定。平均滅活對(duì)數(shù)值計(jì)算，評(píng)價(jià)。

       病毒滅活檢測(cè)的試驗(yàn)階段：

       空氣消毒試驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)、模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)與現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，各自特點(diǎn)如下：

       (1)實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)：以測(cè)定低有效劑量為目的，采用≥1m試驗(yàn)柜、液體撞擊式采樣器、白色葡萄球菌，試驗(yàn)菌霧粒<10μm，試驗(yàn)溫度在20℃到25℃之間，相對(duì)濕度保持在50%~70%，中和劑加于采樣液中，試驗(yàn)時(shí)需要自然消亡對(duì)照組，計(jì)算殺滅率結(jié)果。同一條件試驗(yàn)重復(fù)3次，每次均分別計(jì)算其殺滅率。3次結(jié)果的殺滅率均≥99.90%時(shí),可判為消毒合格。

       (2)模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)：以測(cè)定低有效劑量為目的，采用10m~20m實(shí)驗(yàn)室、六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器、白色葡萄球菌，試驗(yàn)菌霧粒<10μm，試驗(yàn)溫度在20℃到25℃之間，相對(duì)濕度保持在50%~70%，中和劑加于采樣培養(yǎng)基中，試驗(yàn)時(shí)需要自然消亡對(duì)照組，計(jì)算殺滅率結(jié)果。同一條件試驗(yàn)重復(fù)3次，每次均分別計(jì)算其殺滅率。3次結(jié)果的殺滅率均≥99.90%時(shí),可判為消毒合格。

       (3)現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)：以驗(yàn)證實(shí)用消毒效果為目的，采用≥20m實(shí)驗(yàn)室、六級(jí)篩孔空氣撞擊式采樣器、空氣中自然菌，試驗(yàn)菌霧粒不定，試驗(yàn)溫度和相對(duì)濕度均為自然條件，中和劑加于采樣培養(yǎng)基中，試驗(yàn)時(shí)不需要自然消亡對(duì)照組，計(jì)算消亡率結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次或以上。計(jì)算出每次的消亡率。除有特殊要求者外，對(duì)無(wú)人室內(nèi)進(jìn)行的空氣消毒，每次的自然菌消亡率均≥90%者為合格。