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目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>光合作用系列>> 乙醇酸氧化酶測(cè)試盒紫外分光光度法

乙醇酸氧化酶測(cè)試盒紫外分光光度法
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具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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更新時(shí)間:2023-12-24 09:26:17瀏覽次數(shù):636評(píng)價(jià)

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貨號(hào) BK-01S7004
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實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱:乙醇酸氧化酶測(cè)試盒紫外分光光度法

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣

檢測(cè)方法:紫外分光光度法

產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S7004

產(chǎn)品分類:光合作用系列
商品介紹:

測(cè)定意義:

乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.1)是植物光呼吸代謝中的關(guān)鍵酶,也是光下合成草酸的關(guān)鍵酶,它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,對(duì)研究光呼吸代謝過(guò)程及其調(diào)控具有重要意義。

測(cè)定原理

乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和鹽酸苯肼反應(yīng)生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1mL石英比色皿。

所需的儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

 

細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

QQ截圖20220307153537.png 

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

50T 玉米MS PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

1mL 超快轉(zhuǎn)染試劑盒 Rapid Transfection Reagent 2-8℃保存

100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.5  HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.5  常溫保存

9 mL 2X PCR Mix(即用型PCR試劑盒3.0) Instant PCR Kit 3.0 -20℃保存

2 ug pLV-tTRKRAB pLV-tTRKRAB 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

5mL 間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子-無(wú)血淸 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

1瓶 NCI-H1688細(xì)胞株 NCI-H1688 低溫運(yùn)輸和保存

營(yíng)養(yǎng)瓊脂(瓊脂20g) Nutrient Agar(Agar 20g) 250g

10g D- 阿拉伯糖 D-(-)-Arabinose 室溫干燥保存

250mL Tris-Acetate Buffer,1M,pH7.4  Tris-Acetate Buffer,1M,pH7.4  常溫保存

1mL 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,2mg/mL BSA Standard -20℃保存

乙醇酸氧化酶測(cè)試盒紫外分光光度法Goat Anti-rat IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlNecdin  生抑制蛋白NDN抗體 規(guī)格: 0.2ml

PCDHGA2  原鈣粘蛋白γA2抗體 規(guī)格: 0.2mlNAIP  神經(jīng)細(xì)胞凋亡抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

hnRNP U  異質(zhì)核糖核蛋白U抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-human IgM/Bio  標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.3ml

phospho-Rab24(Tyr17)  磷酸化ras基因相關(guān)蛋白R(shí)ab24抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-dog IgG/APC  APC標(biāo)記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1ml

IGF1R/CD221  胰島素樣生因子I受體抗體 規(guī)格: 0.1mlα-Synuclein  核突觸蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mycobacterium human  人結(jié)核桿菌菌體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlWDR16  WD重復(fù)蛋白16抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse anti-human IgG ascites  小鼠抗人IgG腹水 規(guī)格: 1mlCPLA2  胞漿型磷脂A2抗體 規(guī)格: 0.2ml

HABP2  透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlSDF-1/CXCL12  基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-Monkey IgM/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.5mlHDHD2B/LHPP  HDHD2B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

HPRG/HRG  組富含脯糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlAMH/MIS  Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體 0.2ml

Rabbit anti-Rat IgG whole serum  兔抗大鼠IgG抗清 規(guī)格: 1mlMouse Anti-human IgM/Bio  標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 0.3ml

Factor IX  凝因子9抗體 規(guī)格: 0.2mlRCC1  染色體濃調(diào)控蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml 

 


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