目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>光合作用系列>> 乙醇酸氧化酶測(cè)試盒紫外分光光度法
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更新時(shí)間:2023-12-24 09:26:17瀏覽次數(shù):636評(píng)價(jià)
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貨號(hào) | BK-01S7004 |
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實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:乙醇酸氧化酶測(cè)試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S7004
產(chǎn)品分類:光合作用系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.1)是植物光呼吸代謝中的關(guān)鍵酶,也是光下合成草酸的關(guān)鍵酶,它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,對(duì)研究光呼吸代謝過(guò)程及其調(diào)控具有重要意義。 測(cè)定原理 乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和鹽酸苯肼反應(yīng)生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1mL石英比色皿。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
50T 玉米MS PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
1mL 超快轉(zhuǎn)染試劑盒 Rapid Transfection Reagent 2-8℃保存
100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.5 HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.5 常溫保存
9 mL 2X PCR Mix(即用型PCR試劑盒3.0) Instant PCR Kit 3.0 -20℃保存
2 ug pLV-tTRKRAB pLV-tTRKRAB 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
5mL 間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子-無(wú)血淸 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
1瓶 NCI-H1688細(xì)胞株 NCI-H1688 低溫運(yùn)輸和保存
營(yíng)養(yǎng)瓊脂(瓊脂20g) Nutrient Agar(Agar 20g) 250g
10g D- 阿拉伯糖 D-(-)-Arabinose 室溫干燥保存
250mL Tris-Acetate Buffer,1M,pH7.4 Tris-Acetate Buffer,1M,pH7.4 常溫保存
1mL 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,2mg/mL BSA Standard -20℃保存
乙醇酸氧化酶測(cè)試盒紫外分光光度法Goat Anti-rat IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlNecdin 生抑制蛋白NDN抗體 規(guī)格: 0.2ml
PCDHGA2 原鈣粘蛋白γA2抗體 規(guī)格: 0.2mlNAIP 神經(jīng)細(xì)胞凋亡抑制蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
hnRNP U 異質(zhì)核糖核蛋白U抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-human IgM/Bio 標(biāo)記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.3ml
phospho-Rab24(Tyr17) 磷酸化ras基因相關(guān)蛋白R(shí)ab24抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-dog IgG/APC APC標(biāo)記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1ml
IGF1R/CD221 胰島素樣生因子I受體抗體 規(guī)格: 0.1mlα-Synuclein 核突觸蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mycobacterium human 人結(jié)核桿菌菌體蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlWDR16 WD重復(fù)蛋白16抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse anti-human IgG ascites 小鼠抗人IgG腹水 規(guī)格: 1mlCPLA2 胞漿型磷脂A2抗體 規(guī)格: 0.2ml
HABP2 透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlSDF-1/CXCL12 基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-Monkey IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.5mlHDHD2B/LHPP HDHD2B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
HPRG/HRG 組富含脯糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlAMH/MIS Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體 0.2ml
Rabbit anti-Rat IgG whole serum 兔抗大鼠IgG抗清 規(guī)格: 1mlMouse Anti-human IgM/Bio 標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 0.3ml
Factor IX 凝因子9抗體 規(guī)格: 0.2mlRCC1 染色體濃調(diào)控蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
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