實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RealTime PCR）技術(shù)服務(wù)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RealTime PCR）技術(shù)服務(wù)

     實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)即是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR避免了傳統(tǒng)PCR以終產(chǎn)物檢測(cè)定量產(chǎn)生的偏差，提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的 mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。

SYBR Green熒光染料法

SYBR Green是一種DNA結(jié)合染料，能非特異地?fù)饺氲诫p鏈DNA中去。在游離狀態(tài)下，它不發(fā)出熒光，但一旦結(jié)合到雙鏈DNA中以后，便可以發(fā)出熒光。它的zui大優(yōu)點(diǎn)就是可以與任意引物、模板相配合，用于任意反應(yīng)體系中。從經(jīng)濟(jì)角度考慮，它也比其它的探針的價(jià)格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA結(jié)合，所以一旦反應(yīng)體系中出現(xiàn)非特異擴(kuò)增，那它就會(huì)影響到定量結(jié)果的可靠性與重復(fù)性。要避免這種不利因素，可以通過(guò)選擇良好的引物并優(yōu)化反應(yīng)條件以消除非特異性影響。

TaqMan熒光探針?lè)?/strong>
　　PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5-3外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

上海研吉代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：
一、分子生物學(xué)檢測(cè)服務(wù)
1、 引物設(shè)計(jì)合成（人、大鼠、小鼠、兔等）
2、 基因表達(dá)水平檢測(cè)、內(nèi)參檢測(cè)
3、 SNP檢測(cè)服務(wù)
4、 甲基化檢測(cè)服務(wù)
5、 測(cè)序技術(shù)服務(wù)
6、 芯片檢測(cè)（全基因、MicroRNA）
7、 染色體分析

二、病理形態(tài)學(xué)檢測(cè)
1、 HE、特殊染色（PAS、MASSON等）
2、 電鏡（透射、掃描、免疫透射等）
3、 免疫組化（陽(yáng)性表達(dá)部位、陽(yáng)性面積、陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)、微血管密度、
淋巴管密度、光密度等）
4、 TUNEL研究細(xì)胞凋亡，常規(guī)病理細(xì)胞形態(tài)分析
5、 組織芯片
6、 原位雜交（DNA、RNA、MicroRNA等）

三、蛋白質(zhì)技術(shù)服務(wù)
1、 免疫印跡（Western-blotting）分析
2、 蛋白質(zhì)組學(xué)
3、 凝膠遷滯實(shí)驗(yàn)（EMSA）分析DNA或RNA結(jié)合蛋白

四、免疫學(xué)檢測(cè)服務(wù)
1、 酶聯(lián)免疫（ELISA）技術(shù)
2、 放射免疫（RIA）
3、 化學(xué)發(fā)光
4、 常規(guī)生化檢測(cè)

五、代謝組學(xué)
1、 GC-MS、LC-MS、NMR