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Amplite 比色法過氧化酶檢測試劑盒藍(lán)色是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于過氧化物酶的試劑盒，過氧化酶是常用于與抗體按4:1比例結(jié)合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在與抗體、抗原結(jié)合形成復(fù)合物時不會帶來空間阻礙。與其它酶標(biāo)簽相比，過氧化酶也更便宜；其主要缺點(diǎn)是在保護(hù)劑（例如）存在的條件下溶解性低；而在低濃度下，過氧化酶的活性低。HRP偶聯(lián)物是廣泛用作ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)）、免疫組化技術(shù)、Northern、 Southern和Western blot分析的第二個檢測試劑。Amplite比色法過氧化酶檢測試劑盒 *藍(lán)色* 提供了一種快速(10分鐘)HRP一步法均質(zhì)的、無需洗脫的分析方案。本試劑盒使用Amplite Blue，我們的超靈敏HRP顯色底物，即Amplite Blue作為過氧化酶的顯色底物，它比雙氧水和過氧化酶及其它的過氧化酶的顯色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的靈敏度。Amplite Blue產(chǎn)生高吸收物質(zhì)，在664nm處有吸收峰。這種近紅外吸收使自動化檢測生物樣品時本底吸收很小。本試劑盒可以用于ELISA，酶促反應(yīng)動力學(xué)分析，氧化酶抑制劑高通量篩選等。試劑盒經(jīng)過化處理，并且可用于高通量液體處理設(shè)備。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Amplite 比色法過氧化酶檢測試劑盒藍(lán)色。

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP標(biāo)準(zhǔn)品和/或測試樣品（50μL）
3.在室溫下孵育10-30分鐘
4.監(jiān)測664±5 nm的吸光度

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Amplite 藍(lán)色過氧化物酶底物儲備液（100X）：
將250μLDMSO（組分E）加入到Amplite 藍(lán)色底物（組分A）的小瓶中以制備100X Amplite 藍(lán)色過氧化物酶底物儲備溶液。

1.2 HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液（20 U / mL）：
將1mL測定緩沖液（組分C）加入到HRP小瓶（組分D）中以制備20U / mL HRP儲備溶液。

1.3 H2O2溶液（20 mM）：
將22.7μL的3％H2O2（0.88M，組分B）加入977μL的測定緩沖液（組分C）中以制備20mM H2O2溶液。注意：稀釋的H2O2溶液不穩(wěn)定。應(yīng)丟棄未使用的部分。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

HRP標(biāo)準(zhǔn)
將15μL的20U / mL HRP溶液加入985μL的測定緩沖液（組分C）中，得到300mU / mL的HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7）。取300 mU / mL HRP標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7），進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到連續(xù)稀釋的HRP標(biāo)準(zhǔn)品（SD6 - SD1）和分析緩沖液（組分C）。

3.工作溶液

將50μL的Amplite Blue Peroxidase Substrate儲備液（100X）和50μL的H2O2儲備溶液（20 mM）加入到4.9 mL的分析緩沖液（組分C）中，使總體積為5 mL的HRP工作溶液，避光。