人妻精品久久久久中文字幕青草,999久久久免费看,午夜性爱福利,96无码

技術(shù)中心

您現(xiàn)在的位置:環(huán)保在線 > 技術(shù)首頁(yè) > 環(huán)保工程

豬白介素4(IL-4)ELISA試劑盒說明書

2009年12月25日 17:41:37人氣:362來源:廈門慧嘉生物科技有限公司

豬白介素4(IL-4)ELISA試劑盒說明書

本試劑盒僅供體外研究使用!

預(yù)期應(yīng)用

ELISA法定量測(cè)定豬血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中白介素4(IL-4)含量。

 

實(shí)驗(yàn)原理

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗IL-4抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的抗IL-4抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的IL-4呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。

 

試劑盒組成及試劑配制

1.        酶聯(lián)板:一塊(96孔)

2.        標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為2,000 pg/ml,做系列倍比稀釋注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋后,分別稀釋成2,000 pg/ml1,000 pg/ml500 pg/ml,250 pg/ml125 pg/ml,62.5 pg/ml,31.2 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制1,000 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 2,000 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3.        樣品稀釋液1×20ml。

4.        檢測(cè)稀釋液A1×10ml

5.        檢測(cè)稀釋液B1×10ml。

6.        檢測(cè)溶液A1×120μl1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(100μl/孔),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測(cè)溶液A990μl檢測(cè)稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。

7.        檢測(cè)溶液B1×120μl/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。

8.        底物溶液1×10ml/瓶。

9.        濃洗滌液1×30ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10.    終止液1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

11.    覆膜5

12.    使用說明書:1

 

自備物品

1.   酶標(biāo)儀(建議參考儀器使用說明提前預(yù)熱)

2.   微量加液器及吸頭,EP

3.   蒸餾水或去離子水,全新濾紙

 

標(biāo)本的采集及保存

1.        血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.        血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標(biāo)本放于-20-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.        細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20-80保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注:以上標(biāo)本置4保存應(yīng)小于1周,-20-80均應(yīng)密封保存-20不應(yīng)超過1個(gè)月,-80不應(yīng)超過2個(gè)月;標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

 

操作步驟

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?/span>100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.        依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.        用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

 

1.  試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,避免交叉污染。

2.   加樣:加樣或加試劑時(shí),請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時(shí),*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。

3.   孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。

4.   洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

5.  試劑配制:Detection ADetection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請(qǐng)配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差;請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。

6.  反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。

7.  底物:底物請(qǐng)避光保存,在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。

 

洗板方法

1.  手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。

2.  自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

 

特異性

    本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的豬IL-4,且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。

 

計(jì)算

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),OD值為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析,如curve expert 1.3,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

 

檢測(cè)范圍:31.2 pg/ml - 2,000 pg/ml

 

zui低檢測(cè)限15.6 pg/ml

 

說明

1.         在儲(chǔ)存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。

2.         試劑盒保存:短期(1周以內(nèi))以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn),長(zhǎng)期保存請(qǐng)將試劑全部保存于-20

3.         濃洗滌液會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。

4.         剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。

5.         所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。

6.         有效期:6個(gè)月。

7.         本操作說明適用于48T試劑盒,但48T試劑盒所有試劑減半。

 

廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)代理眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的。致力于各種ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒、一抗二抗、細(xì)胞因子、生物試劑、移液器、耗材的銷售推廣及服務(wù)工作。
咨詢     

 

 

豬白介素4(IL-4)ELISA試劑盒說明書

全年征稿/資訊合作 聯(lián)系郵箱:hbzhan@vip.qq.com
版權(quán)與免責(zé)聲明
1、凡本網(wǎng)注明"來源:環(huán)保在線"的所有作品,版權(quán)均屬于環(huán)保在線,轉(zhuǎn)載請(qǐng)必須注明環(huán)保在線,http://szhxt8.com.cn。違反者本網(wǎng)將追究相關(guān)法律責(zé)任。
2、企業(yè)發(fā)布的公司新聞、技術(shù)文章、資料下載等內(nèi)容,如涉及侵權(quán)、違規(guī)遭投訴的,一律由發(fā)布企業(yè)自行承擔(dān)責(zé)任,本網(wǎng)有權(quán)刪除內(nèi)容并追溯責(zé)任。
3、本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來源的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或證實(shí)其內(nèi)容的真實(shí)性,不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
4、如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

廈門慧嘉生物科技有限公司作者

我要投稿
  • 投稿請(qǐng)發(fā)送郵件至:(郵件標(biāo)題請(qǐng)備注“投稿”)hbzhan@vip.qq.com
  • 聯(lián)系電話0571-87759680
環(huán)保行業(yè)“互聯(lián)網(wǎng)+”服務(wù)平臺(tái)
環(huán)保在線APP

功能豐富 實(shí)時(shí)交流

環(huán)保在線小程序

訂閱獲取更多服務(wù)

微信公眾號(hào)

關(guān)注我們

抖音

環(huán)保在線網(wǎng)

抖音號(hào):hbzhan

打開抖音 搜索頁(yè)掃一掃

視頻號(hào)

環(huán)保在線

公眾號(hào):環(huán)保在線

打開微信掃碼關(guān)注視頻號(hào)

快手

環(huán)保在線

快手ID:2537047074

打開快手 掃一掃關(guān)注
意見反饋
少妇在线| 无码人妻丰满熟妇一区二区三区| 久久久久久久无码视频| 婷婷五月在线| 免费色网站| 五月婷婷av| 韩国AV无码| 欧美精品在线视频| 亚洲精品无码成人片久久不卡| 久热大香蕉| 邻居少妇张开腿让我爽了在线观看 | 国产精品XXXX喷水欧美| 高潮久久久| 亚欧精品| 亚洲无码在线观看视频| 国产一区二区黄片| 国产精品毛片视频| 公侵犯人妻一区二区三区| 欧美熟女网站| 夜夜操免费视频| 国产成人三级三级三级97| 天天干天天日| 无码国产伦一区二区三区偷人视频| 亚洲精品国产精品国自产在线| 91人妻人人澡人人爽人人精品一 | 中文字幕人妻久久| 亚洲无码一区二区三区视频| 中文字幕一区二区三区无码 | 97久久精品无码一区二区| 草莓视频在线免费观看| 青青草原精品99久久精品66| 99久久精品国产一区二区狐狸| 久久免费综合| 日韩人妻二区| 一本色道精品综合久久无码人妻| 69人人人人| 国产精品毛片久久刘婷αv| 无码人妻精品一区二区三区9厂 | 日韩精品无码人妻系列AV牛牛| 无码人妻精一区二区三区| 精品美女久久|