HEL299紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)HEL299紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2,4-DiMethoxybenzylchloride 2,4-二甲氧基芐基氯 55791-52-1
2,4-DiMethoxybenzylaMine 2,4-二甲氧基苯甲胺 20781-20-8
Benzene,1-(broMoMethyl)-2,4-diMethoxy- 2,4-二甲氧基芐基溴 161919-74-0
2,4-DIMETHOXYPYRIDINE 2,4-二甲氧基吡啶 18677-43-5
2,4-DIMETHYL-1,3-PENTADIENE 2,4-二甲基-1,3-戊二烯 1000-86-8
2,4-diMethyl-1H-pyrrole 2,4-二甲基吡咯 625-82-1
2,4-diMethyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid 2,4-二甲基吡咯-3-甲酸 17106-13-7
2,4-DiMethyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid ethyl ester 2,4-二甲基-3-吡咯羧酸乙酯 2199-51-1
2,4-diMethylthiophene 2,4-二甲基噻吩 638-00-6
2,4-DIMETHYLVALERONITRILE 2-甲基戊腈 6339-13-5
2,4-Dinitroaniline 2,4-二硝基苯胺 1997/2/9
2,4-Dinitrochlorobenzene 2,4-二硝基氯苯 97-00-7
2,4-Dinitrophenol 2,4-二硝基酚 51-28-5
2,4-Dinitrophenol-3,5,6-d3 93951-77-0
2,4-Dioxo-2,4-dihydro-1H-benzo[d][1,3]oxazine-6-carboxylic acid 2,4-二氧代-2,4-二氫-1H-苯并[1,3]惡嗪-6-羧酸 77423-13-3
2,4-OXAZOLIDINEDIONE 2,4-惡唑烷二酮 2346-26-1
2,4-Pentadienoicacid, 5-phenyl-, (2E,4E)- 28010-12-0
2,4-Pentanedione 乙酰丙酮 123-54-6
2,4-Pyridinedicarboxylic acid hydrate 2,4-吡啶二羧酸 499-80-9
2,5,6-Trichloro-3-pyridinecarbonitrile 2,5,6-三氯吡啶-3-甲腈 40381-92-8
2,5,8,11,14,17,20,23,26-nonaoxaheptacosane 25990-94-7
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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