SMC-1胸膜細(xì)胞瘤上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)SMC-1胸膜細(xì)胞瘤:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1-broMohenicosafluorodecane 1-溴全氟癸烷 307-43-7
1DisodiuM 4-aMino-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonate 3963-80-2
1g 479024-70-9
3-[(TERT-BUTOXYCARBONYL)AMINO]-3-CYCLOPENTYLPROPANOIC ACID 776330-74-6
1g 5g 4919-00-0
1g 5g 4-*唑啉-7-甲酸 942507-89-3
1g 5g 10g 6041-23-2
1g, 2 5 500Mg 3,3'-(羥基亞硝基肼)二-1-丙胺 146724-95-0
1g, 2g, 5g 2-氟丙烯酸 430-99-9
1g,2g,5g 2-甲基-1-苯基哌嗪 2946-76-1
1g/850 934505-32-5
1g/2100 2,7-二溴菲醌 84405-44-7
1g? 5g 74528-53-3
1g-5g 原人參二醇 2302-51-9
1H-1,2,4-Triazole,5-fluoro-(9CI) 42297-29-0
1H-2-Benzopyran-1-one 異薰草素 491-31-6
1H-Benz[de]isoquinoline-5,8-disulfonicacid, 7-aMino-2-(5-aMinopentyl)-2,3-dihydro-1,3-dioxo-, potassiuM salt (1:2) 149733-79-9
1H-BENZIMIDAZOL-2-AMINE,4,7-DIMETHYL- 67468-93-3
2-Phenyl-1H-benzoiMidazol-5-ylaMine 2-苯基-1H-苯并咪唑-5-基胺 1767-25-5
1H-BENZIMIDAZOLE, 3A,4,5,6,7,7A-HEXAHYDRO- 2018-50-0
1H-BenziMidazole-2-carboxaldehyde 苯并咪唑-2-甲醛 3314-30-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
暫無信息 |