AsPC-1轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)AsPC-1轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1H-Pyrrole-1-pentanoicacid, 2,5-dihydro-2,5-dioxo-, 2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl ester 103750-03-4
1H-Pyrrole-2,5-dione,1,1 118377-62-1
1H-Pyrrole-2,5-dione,3-(1-Methyl-1H-indol-3-yl)-4-[1-[1-(2-pyridinylMethyl)-4-piperidinyl]-1H-indol-3-yl]-,hydrochloride (1:1) 359017-79-1
1-Methyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid 1-甲基-1H-吡咯-3-羧酸 36929-61-0
H-Pyrrolo[2,3-b]pyridin-5-ol, 4-fluoro- (9CI) 651744-21-7
1H-PYRROLO[2,3-B]PYRIDINE-2,3-DIONE 1H-吡咯[2,3-B]吡啶-2,3-二酮 5654-95-5
1H-Pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-propanoic acid 1H-吡咯并[2,3-B]吡啶-3-丙酸 27663-72-5
1H-PYRROLO[2,3-B]PYRIDINE-4-CARBOXYLIC ACID 7-氮雜吲哚-4-羧酸 479553-01-0
1H-PYRROLO[2,3-B]PYRIDINE-6-CARBOXYLIC ACID 7-氮雜吲哚-6-羧酸 898746-35-5
1H-Pyrrolo[2,3-c]pyridine,2,3-dihydro-(9CI) 2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-C]吡啶 760919-39-9
Ethyl 4-chloro-7h-pyrrolo[2,3-d]pyriMidine-6-carboxylate 4-氯-7H-吡咯并[2,3-D]嘧啶-6-甲酸乙酯 187725-00-4
4-Azaindole-3-carboxylic acid 1H-吡咯并[3,2-B]吡啶-3-羧酸 860496-20-4
1H-Pyrrolo[3,2-B]pyridine-6-boronic acid pinacol ester 1045855-91-1
1-Hydroxy-1-phenylacetone 1-羥基-1-苯丙酮 90-63-1
1-HYDROXY-2-BUTANONE 1-羥基-2-丁酮 5077-67-8
1-Hydroxy-3-cyclohexene 1-羥基-3-環(huán)己烯 822-66-2
1-hydroxyisoquinoline 1-羥基異喹啉 491-30-5
1-Hydroxypyridine-2(1H)-Thione 吡啶硫酮 1121-30-8
1-IODO-1H,1H,2H,2H-PERFLUOROTETRADECANE 30046-31-2
1-Isopropenyl-4-Methoxybenzene 1-異丙烯基-4-甲氧基苯 1712-69-2
SulbutiaMine 舒布硫胺 3286-46-2
1Kg and 5Kg 4167/2/6
1-Methoxy-2-propyl acetate 丙二醇甲醚醋酸酯 108-65-6
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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