SMMC-7721肝癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)SMMC-7721肝癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
-CHLOROMETHYL-2,2,3,3-TETRAFLUOROCYCLOBUTANE 1-氯甲基-2,2,3,3-四氟環(huán)丁烷 356-80-9
1-ChloroMethyl-4-fluoro-1,4-diazoniabicyclo[2.2.2]octane bis(tetrafluoroborate) 1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)鹽 140681-55-6
1-CHLORO-N,N-DIMETHYL-2-PROPYLAMINE 2-二甲氨基氯丙烷 53309-35-6
1-cya-cyclopentene 氰基-1-環(huán)戊烯,97% 3047-38-9
1-CYANODECANE N-十一烷基腈 2244/7/7
1-Cyclohexene-1-carboxylic acid 環(huán)己烯甲酸 636-82-8
1-Isocyanocyclohexene 異氰基環(huán)己烯 1121-57-9
1-Cyclopentene-1,2-dicarboxylic anhydride 1-環(huán)戊烯-1,2-二羧酸酐 3205-94-5
1-Cyclopentene-1-carboxylicacid,5-oxo-,Methylester(9CI) 36601-73-7
1-CYCLOPENTYL-1-PHENYLMETHANAMINE 苯基環(huán)戊基甲胺 23459-36-1
1-Deoxy-1-[(3,4-diMethylphenyl)aMino]-D-ribitol 1-(D-核糖氨基)-3,4-二甲基苯 3051-94-3
1-diethoxyphosphorylsulfanyl-4-nitro-benzene 3270-86-8
1-DIMETHYLAMINO-2-METHYL-2-AMINOPROPANE 1-二甲基氨基-2-甲基-2-氨基丙烷 89379-40-8
1-Dodecanethiol 十二硫醇 112-55-0
1-DodecylaMine hydrochloride 癸胺鹽酸鹽 929-73-7
1-epi-Calcitriol 66791-71-7
1-Ethoxycarbonylbicyclo[2.2.2]octane-4-carboxylic acid 834-50-4
1-Ethyl-3,5-difluorobenzene 3,5-二氟乙苯 117358-52-8
1-ethylvinyl acetate 10500-08-0
1fcl 14737-08-7
1-FLUORO-3-(2-NITRO-IMIDAZOL-1-YL)-PROPAN-2-OL 氟甲氧甲基硝基咪唑乙醇 13551-89-8
1-FLUORO-5-HEXENE 373-15-9
BIS(2-CHLOROISOPROPYL)ETHER 二氯異108-60-1
1g 4-甲基-2-氨基噻吩鹽酸鹽 14770-82-2
1g 水合氧化鐵(III) 20344-49-4
1g 203866-21-1
1g 4-(氮雜環(huán)丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 219725-67-4
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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