TE-1食管癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)TE-1食管癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1-(2-Pyridylazo)-2-Naphthol 1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 85-85-8
1-(3,4-DIMETHYLBENZYL)PIPERAZINE 1-(3,4-二甲基苯基)哌嗪 212393-09-4
1-(3-BROMOPHENYL)-2-METHYLPROPAN-1-ONE 1-(3-溴苯基)-2-甲基丙-1-酮 2415-93-2
1-(3-BROMO-PHENYL)-BUTANE-1,3-DIONE 1-(3-溴苯基)-1,3-丁二酮 4023-81-8
1-(3-Chlorophenyl)-5-isopropylbiguanide 1071546-52-5
1-(3-Chlorophenyl)piperazine Monohydrochloride 1-(3-)哌嗪鹽酸鹽 13078-15-4
1-(3-cyano-3,3-diphenylpropyl)-4-phenylpiperidine-4-carboxylic acid Monohydrochloride 35607-36-4
1-(3-cyclohexen-1-ylcarbonyl)-2-Methylpiperidine 6946-24-3
1-(3-DiMethylaMinopropyl)-3-ethylcarbodiiMide hydrochloride 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽 25952-53-8
1-(3-iodophenyl)-cycloprop* 1-(3-碘苯基)-環(huán)丙胺鹽酸鹽 597561-47-2
1-(4,5-METHYLENEDIOXY-2-NITROPHENOL)ETHAN-2-OL 1-(4,5-亞甲基二氧基-2-硝基*)-2-乙醇 159873-64-0
1-(4-AMino-3-chloro-phenyl)-ethanone 72531-23-8
1-(4-BroMophenyl)-4-pentylcyclohexane 153873-83-7
1-(4-chlorophenyl)-1,3,8-triazaspiro[4.5]decan-4-one 1-(4-)-1,3,8-三氮螺[4.5]癸烷-4-酮 61271-84-9
1-(4-CHLOROPHENYL)-1-CYCLOHEXANECARBOXYLIC ACID 1-(4-氯苯)-1-環(huán)己氨羧酸 58880-37-8
1-(4-CHLOROPHENYL)-1-CYCLOPENTANECARBOXYLIC ACID 1-(4-)-1-環(huán)戊烷甲酸 80789-69-1
1-(4-Chlorophenyl)-1-phenylethanol 1-(4-)-1-苯基乙醇 59767-24-7
1-(4-Chlorophenyl)-2-Cyclopropylpropanon-1 1-(4-)-2-環(huán)丙基-1-丙酮 123989-29-7
1-(4-DiethylaMinophenyl)-1,4,4-triphenyl-1,3-butadiene 1-(4-二乙氨基苯基)-1,4,4-三苯基-1,3-丁二烯 115655-09-9
1-(4-fluorophenyl)-1,3,8-triazaspiro[4.5]decan-4-one 58012-16-1
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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