KB口腔表皮樣癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)KB口腔表皮樣癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
1-BROMO-6-METHYLHEPTANE 52648-04-1
2-Methyl-1-[1-(2-Methylpropoxy)ethoxy]propane 5669-09-0
(S)-TERT-BUTOXYCARBONYLAMINO-CYCLOBUTYL-ACETIC ACID Boc-L-環(huán)丁基* 155905-77-4
(S)-tert-butyl 2-(cyanoMethyl)pyrrolidine-1-carboxylate (S)-2-(氰基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯 142253-50-7
(S)-tert-butyl 3-oxo-1-phenylpropylcarbaMate (S)-3-氧代-1-苯基丙基氨基甲酸叔丁酯 135865-78-0
(R)-1-Benzyl-5-oxo-pyrrolidine-3-carboxylic acid Methyl ester R-N-芐基-5-氧代-3-吡咯烷甲酸甲酯 428518-36-9
(R)-1-Boc-3-hydroxypyrrolidine (R)-1-BOC-3-羥基吡咯烷 103057-44-9
(R)-1-Boc-pyrrolidine-3-carboxylic acid Methyl ester (R)-1-Boc-3-羧基吡咯烷甲酯 441717-40-4
(R)-1-Cbz-3-AMinopyrrolidine hydrochloride (R)-1-Cbz-3-氨基吡咯烷鹽酸鹽 870621-17-3
(R)-3-AMinopyrrolidine (R)-3-氨基吡咯烷 116183-82-5
(R)-3-BUTEN-2-OL) 33447-72-2
(R)-3-Hydroxypyrrolidin-2-one (R)-3-羥基吡咯烷酮 77510-50-0
(R)-3-Hydroxyphenylglycine 25698-27-5
(R)-3-Methyl-1-((3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-triMethylhexahydro-4,6-Methanobenzo[d][1,3,2]dioxaborol-2-yl)butan-1-aMiniuM 2,2,2-trifluoroacetate (aR,3aS,4S,6S,7aR)-六氫-3a,8,8-*基-alpha-(2-甲基丙基)-4,6-甲橋-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-甲胺 179324-87-9
(R)-3-Methyl-pyrrolidine hydrochloride (R)-3-甲基吡咯烷鹽酸鹽 235093-98-8
(R)-3-MORPHOLINECARBOXYLIC ACID HCL (R)-3-羧基嗎啉 106825-81-4
(R)-4-(3-AMINO-BUTYL)-PHENOL 115548-15-7
MedetoMidine HCL (R)-4-[1-(2,3-二甲基苯基)乙基]-1H-咪唑鹽酸鹽 86347-15-1
(R)-4-AMinoMethyl-thiazolidine-3-carboxylic acid tert-butyl ester (R)-4-氨基甲基噻唑啉-3-甲酸叔丁酯 391248-13-8
(R)-4-benzylpiperazine-2-carboxylic acid (R)-4-苯基哌嗪-2-羧酸 137442-19-4
(R)-4-BOC-THIOMORPHOLINE-3-CARBOXYLIC ACID (R)-4-叔丁氧羰基硫代嗎啉-3-甲酸 114525-81-4
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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