MFC胃癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)MFC胃癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
KEROSENE C5-20正鏈烷石蠟 64771-72-8
Ammonium nitrate 6484-52-2
CALCIUM SACCHARIN 糖精鈣 6485-34-3
750 graMs 順式-2,6-二甲基嗎啉 6485-55-8
(TETRAHYDRO-PYRAN-4-YL)-ACETALDEHYDE 四氫吡喃-4-乙醛 65626-23-5
4-tridecenyl acetate 煤焦油 65996-93-2
3-oxetanon 3-氧雜環(huán)丁酮 6704-31-0
D-alpha-Amino-beta-phenylpropionic acid D-苯* 673-06-3
5-BROMO-1H-1,2,4-TRIAZOLE-3-CARBOXYLIC ACID 5-溴-1H-1,2,4-三唑-3-甲酸 674287-63-9
Cyanuric fluoride 三聚氟氰 675-14-9
4-BROMOINDOLE-1-CARBOXYLIC ACID TERT-BUTYL ESTER 4-溴吲哚-1-羧基 酸 叔-丁基 酯 676448-17-2
Isepamicin sulfate 硫酸* 67814-76-0
C12-15 PARETH-2 C12-15 鏈烷醇聚醚-2 68131-39-5
Fatty acids, C18-unsatd., dimers, reaction products with polyethylenepolyamines 聚酰胺樹脂 68410-23-1
SODIUM LAURYL ETHER SULFATE 月桂基聚氧乙烯醚硫酸鈉 68585-34-2
Sodium [(2,3-dihydro-1,5-dimethyl-3-oxo-2-phenyl-1H-pyrazol-4-yl)methylamino]methanesulfonate * 68-89-3
(R)-4-AMINO-3-(4-CHLOROPHENYL)BUTANOIC ACID (R)-* 69308-37-8
liquid,100Ml 辛氧基ganyou 70445-33-9
cyanidin-3-glucoside 2-(3,4-二羥基苯基)-3-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-5,7-二羥基-1-苯并氯化物 7084-24-4
Octenidine 奧替尼啶 71251-02-0
ARTEPILLIN C500Mg, 1g, 5g. 蒿素C 72944-19-5
Decanedioic acid,3-hydroxy- 73141-46-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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