Mo-MuLv/3T3Mo-MuLv感染的3T3細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)Mo-MuLv/3T3Mo-MuLv感染的3T3細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Ponceau 6R C.I. 16250 酸性紅44 2766-77-0
PORPHINE 卟吩 101-60-0
Posaconazole * 171228-49-2
POSACONAZOLE INTER-8 *-8 161532-56-5
Posizolid (5R)-3-[4-[1-[(2S)-2,3-二羥基-1-氧代丙基]-1,2,3,6-四氫-4-吡啶基]-3,5-二氟苯基]-5-[(3-異惡唑氧基)甲基]-2-惡唑烷酮 252260-02-9
PotassiuM 2,3,3-triMethyl-3H-indole-5-sulfonate 2,3,3-*基吲哚-5-磺酸鉀鹽 184351-56-2
PotassiuM 2,5-dihydroxybenzenesulfonate 2,5-二羥基苯磺酸鉀 21799-87-1
PotassiuM 3,7-diMethyl-3-octanoxide in n-heptane (KDMO) 263148-42-1
POTASSIUM 4-ACETYLPHENYLTRIFLUOROBORATE& 4-乙酰基苯基三氟硼酸鉀 252726-24-2
potassiuM aMide 17242-52-3
potassiuM L-ascorbate 15421-15-5
potassiuM azide 20762-60-1
PotassiuM Castorate *酸鉀 8013/5/6
POTASSIUM DI-ISO-PROPYLDITHIOPHOSPHATE 3419-34-9
POTASSIUM DI-TERT-BUTYLPHOSPHATE 磷酸二叔丁酯鉀鹽 33494-80-3
potassiuM dodecyl sulphate 月桂醇硫酸酯鉀 4706-78-9
PotassiuM Gluconate 葡萄糖酸鉀 299-27-4
PotassiuM hydroxyde 氫氧化鉀 1310-58-3
POTASSIUM IODIDE * 7681-11-0
PotassiuM L-aspartate L-天*鉀 14007-45-5
potassiuM laurate 月桂酸鉀 10124-65-9
POTASSIUM METABISULFITE 偏硫代硫酸鉀 16731-55-8
PotassiuM Methanesulfonate, 99% LuMp/powder 甲基磺酸鉀 2386-56-3
PotassiuM Methoxide 甲醇鉀 865-33-8
PotassiuM Nitrate Crystal 硝酸鉀 7757-79-1
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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