Neuro-2A腦神經(jīng)瘤細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體Neuro-2A腦神經(jīng)瘤細(xì)胞):
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Poly-(L-lactic acid) 26811-96-1
POLY(METHYL METHACRYLATE) 聚甲基丙烯酸甲酯 9010-88-2
POLY(METHYL METHACRYLATE) 牙托粉 9011-14-7
POLY(METHYLENE-CO-GUANIDINE), HYDROCHLORIDE 氰基胍與氯化銨和甲醛的聚合物 55295-98-2
Poly(Methylhydrosiloxane) 聚甲基氫硅氧烷 63148-57-2
Poly(oxy-1,2-ethanediyl), .alpha.-2-naphthalenyl-.oMega.-hydroxy- Α-2-萘基-Ω-羥基-聚乙二醇 35545-57-4
Poly(oxy-1,2-ethanediyl), .alpha.-hydro-.oMega.-(9Z)-1-oxo-9-octadecenyloxy-, ether with D-glucitol (6:1) 57171-56-9
POLY(PROPYLENE GLYCOL), TOLYLENE 2,4-DIISOCYANATE TERMINATED 1,3-二異氰酸根合甲苯與α-氫-ω-羥基-聚[氧(甲基-1,2-乙二烷基)]的聚合物 9057-91-4
Poly(sodiuM-p-styrenesulfonate) 聚苯乙烯磺酸鈉 25704-18-1
POLY(UREA-CO-FORMALDEHYDE), BUTYLATED, 6 0 WT % SOLN IN 丁醇化的脲與甲醛的聚合物 68002-19-7
POLY(VINYL METHYL ETHER) 聚(乙烯基甲基醚) 9003/9/2
Poly(vinyl phenyl ketone) 1-苯基-2-丙烯基-1-酮 768-03-6
POLY(VINYLAMINE) HYDROCHLORIDE 乙烯胺均聚物 26336-38-9
POLY[4,5-DIFLUORO-2,2-BIS(TRIFLUOROMETHYL)-1,3-DIOXOLE-CO-TETRAFLUOROETHYLENE] 4,5-二氟-2,2-雙(三氟甲基)-1,3-二氧雜環(huán)戊烯和 1,1,2,2-四氟乙烯共聚物 37626-13-4
SodiuM polyacrylate 聚丙烯酸鈉 9003/4/7
POLYACRYLONITRILE 聚丙烯腈 25014-41-9
PolyaMide 聚酰胺 63428-84-2
PolyaMine N7 多乙烯多胺 29320-38-5
POLYAMINO SUGAR CONDENSATE 多氨基酸多糖縮合物 120022-92-6
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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