HeLa宮頸癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)HeLa宮頸癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Pentaerythrityl Tetrathiol 4720-60-9
Pentaethylene Glycol MonoMethyl Ether 2,5,8,11,14-五氧雜-16-十六烷醇 23778-52-1
PENTAETHYLENEHEXAMINE 五乙烯六胺 4067-16-7
PENTAFLUOROPROPIONIC ACID 五氟丙酸 422-64-0
Pentaglycerol 1,1,1-三(羥甲基)乙烷 77-85-0
PENTANEDIOIC ACID 戊二酸 110-94-1
Pentanoic acid,5-[[(9H-fluoren-9-ylMethoxy)carbonyl]aMino]- FMOC-5-AMINOPENTANOIC ACID 123622-48-0
PENTAZOCINE HYDROCHLORIDE--DEA SCHEDULE IV 64024-15-3
Pentobarbital sodiuM 戊*鈉 57-33-0
Pentosan Sulfuric Polyester 聚戊糖多硫醇 37300-21-3
Pepstatin 抑肽素 26305-03-3
Peroxyacetic acid 過氧乙酸 79-21-0
PeradoxiMe 哌拉肟 67254-81-3
PERCHLORIC ACID 高氯酸 7601-90-3
perchloryl fluoride 過氯酰氟 7616-94-6
Perfiuoroisobutylene 全氟異丁烯 382-21-8
PERFLUORO(2-ETHOXYETHANE)SULFONYL FLUORIDE 67990-78-7
Perfluoro(4-Methyl-3,6-dioxaoCt-7-ene)sulfonyl fluoride 全氟(4-甲基-3,6-二氧雜-7-辛烯)磺酰氟 16090-14-5
Perfluoro-2-Methyl-2-pentene 全氟-2-甲基-2-戊烯 1584-03-8
Perfluorobutylsulfonylfluoride 季銨鹽陽離子氟碳表面活性劑 84166-37-0
PERFLUOROCYCLOHEXANE 全氟代環(huán)已烷 355-68-0
PerfluorooctanesulfonaMide 全氟辛基磺酰胺 754-91-6
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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