22RV1前列腺癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)22RV1前列腺癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
PERFLUOROPENTANE C5-18-全氟烷 678-26-2
O-Phthalaldehyde 鄰苯二甲醛 643-79-8
O-phenyldiaMine dihydrochloride 鄰苯二胺鹽酸鹽(試劑) 615-28-1
o-PhenylendiaMine 1,2-苯二胺 95-54-5
Orciprenaline sulfate 硫酸奧西那林 5874-97-5
OXYCODONE 羥可待酮 76-42-6
OxydopaMine HCL 6-羥基多巴胺鹽酸鹽 28094-15-7
Panthenol USP (DL) 500gM DL-泛醇 16485-10-2
Pantoprazole sodiuM hydrate *鈉水合物 164579-32-2
Pantoprazole sodiuM hydrate 718635-09-7
Para AMinohippuric Acid 對氨基馬尿酸 61-78-9
Paraldehyde 三聚乙醛 123-63-7
PARAMETHASONE ACETATE 帕拉米松乙酸酯 1597-82-6
Para-Methyl Tetrahydroquinoline 喹啉,1,2,3,4-四氫-6-甲基喹啉 91-61-2
PARGEVERINE 帕吉維林 13479-13-5
PARSOL SLX 聚硅氧烷-15 207574-74-1
Parthenolide 小白菊內(nèi)酯 20554-84-1
parvaquone 帕伐醌 4042-30-2
Parylene F DiMer 5,6,11,12,13,14,15,16-八氟三環(huán)[8.2.2.24,7]十六碳-4,6,10,12,13,15-六烯 1785-64-4
Patchouli alcohol 百秋李醇 5986-55-0
PATENT BLUE VIOLET 提純蘭紫 68238-36-8
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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