SW620結(jié)腸癌細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)SW620結(jié)腸癌細(xì)胞 :
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
PENTABROMOBENZYL ACRYLATE 丙烯酸五溴芐酯 59447-55-1
Pentacyclo[19.3.1.13,7.19,13.115,19]octacosa-1(25),3,5,7(28),9,11,13(27),15,17,19(26),21,23-dodecaene,5,11,17,23-tetrabroMo-25,26,27,28-tetrapropoxy- 181640-72-2
PENTACYCLO[5.4.0(2,6).0(3,10).0(5,9)]UNDECANE-8,11-DIONE 五環(huán)[5.4.0.02,6.03,10.05,9]十一烷-8,11-二酮 2958-72-7
PENTAERYTHRITOL DIMETHACRYLATE 26846-58-2
pentaerythritol octahydrogen tetraphosphate 季戊四醇磷酸酯 7440-78-0
Perfluorooctanoic Acid-13C2 碳標(biāo)記全氟辛酸 864071-08-9
XANTHOSINE 5'-MONOPHOSPHATE DISODIUM SALT 黃苷-5′-單磷酸鈉 25899-70-1
Nutlin-3 REL-4-[[(4R,5S)-4,5-雙(4-)-4,5-二氫-2-[4-甲氧基-2-(1-甲基乙氧基)苯基]-1H-咪唑-1-基]羰基]-2-哌嗪酮 548472-68-0
NYLON 6/9 27136-65-8
PyribenzoxiM 嘧啶肟草醚 168088-61-7
O-(2-AMINOETHYL)-O'-(2-(BOC-AMINO)ETHYL) 206265-98-7
PiriMiphos-Methyl 甲基嘧啶磷 29232-93-7
O,O-diethyl O-phenyl thiophosphate 32345-29-2
obatoclax 803712-67-6
Obatoclax Mesilate Obatoclax 甲磺酸鹽 803712-79-0
OBIDOXIME CHLORIDE 雙復(fù)磷 114-90-9
OCHRATOXIN A 赭曲霉素 303-47-9
OCTACHLOROCYCLOPENTENE 八氯環(huán)戊-1-烯 706-78-5
octachlorotrisilane 13596-23-1
Octadecylbis(2-hydroxyethyl)MethylaMMoniuMchloride 3010-24-0
Octaethylene Glycol MonoMethyl Ethe 八聚乙二醇一甲醚 25990-96-9
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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