A9皮下結(jié)締組織細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)A9皮下結(jié)締組織細(xì)胞 :
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Nepetalactone 假荊芥內(nèi)酯 21651-62-7
N-(2-Hydroxypropyl) MethacrylaMide N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺 21442-01-3
N-(2-Mercaptopropionyl)glycine * 1953/2/2
N-(3-(AMinoMethyl)pyridin-2-yl)-N-MethylMethanesulfonaMide N-(3-(氨基甲基)吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺 939791-42-1
PrenylaMine lactate 69-43-2
N-(3-aMino-4-ethoxyphenyl)acetaMide 3-氨基-4-乙氧基-乙酰苯胺 17026-81-2
N-(3-AMinopropyl)MethacrylaMide hydroChloride N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸鹽 鹽酸鹽 72607-53-5
N-(3-BroMopropyl)phthaliMide N-(3-溴丙基)苯二胺 5460-29-7
N-(4-(4-fluorophenyl)-5-((E)-2-((2S,4R)-4-hydroxy-6-oxotetrahydro-2H-pyran-2-yl)vinyl)-6-isopropylpyriMidin-2-yl)-N-MethylMethanesulfonaMide *-5S-內(nèi)酯 503610-43-3
N-(6-AMinohexyl)MaleiMide hydrochloride salt N-(6-氨基己基)馬來酰亞胺鹽酸鹽 75238-09-4
N-(carboxyMethyl)-N-[2-(2,5-dihydro-2,5-dioxo-1H-pyrrol-1-yl)ethyl]- Glycine 207612-92-8
N,N'-Bis(2,4,6-triMethylphenyl)ethane-1,2-diaMine N,N'-二(2,4,6-*基苯基)乙二胺 134030-21-0
N,N'-Bis(2-hydroxyethyl)-1,3-propanediaMine N,N'-二(2-羥乙基)-1,3-丙二胺 10563-27-6
N,N'-Bis(2-hydroxyethyl)ethylene diaMine N,N-Bis(2-羥乙基)乙二胺 4439-20-7
Trilon M Liquid 二羧甲基*三鈉 164462-16-2
N,N-BIS(CARBOXYMETHYL)-L-GLUTAMIC ACID TETRASODIUM SALT *二乙酸四鈉 51981-21-6
N,N-Bis(salicylidene)-o-phenylenediaMine VanadiuM(IV) oxide CoMplex 32065-17-1
N,N'-bis(salicylideneaMino)ethane-Manganese(II) N,N'-雙(亞水楊基)-1,2-乙二胺-錳(II) 53177-12-1
N,N'-Di(1-naphthyl)-4,4'-benzidine N,N'-二(1-萘基)-4,4'-聯(lián)苯二胺 152670-41-2
N,N'-DIACETYLCHITOBIOSE N,N'-二乙?;鶜ざ?nbsp;35061-50-8
N,N'-Dibutyl-perylene-3,4,9,10-tetracarboxylic acid diiMide PTCDI-C4 76372-76-4
N,N-Dicyclohexyl-2-benzothiazolsulfene aMide N,N-二環(huán)己基-2-苯并噻唑次磺酰胺 4979-32-2
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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