293T/17 [HEK 293T/17] 人胚腎細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體293T/17 [HEK 293T/17] 人胚腎細(xì)胞):
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌293T/17 [HEK 293T/17] 人胚腎細(xì)胞細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Min 29204-02-2
Min (E)-11-二十烯酸 5561-99-9
MONOLAURIN 月桂酸ganyou酯 142-18-7
MONO-N-HEPTYLTIN TRICHLORIDE 二庚基錫標(biāo)準(zhǔn)品 59344-47-7
Mustard gas 芥子氣 505-60-2
MUTANOLYSIN 變?nèi)芫?nbsp;55466-22-3
Mycolic acids 分枝菌酸 37281-34-8
Methyl 1-(4-broMophenyl)cyclopropanecarboxylate METHYL 1-(4-BROMOPHENYL)CYCLOPROPANECARBOXYLATE 638220-35-6
METHYL 1,2,3,4-TETRA-O-ACETYL-BETA-D-GLUCURONATE 1,2,3,4-四-O-乙?;?Β-D-葡萄糖醛酸甲酯 7355-18-2
Methyl 10-DOXYL-stearate, free radical 35203-84-0
Methyl 1H-pyrazole-3-carboxylate 3-吡唑羧酸甲酯 15366-34-4
METHYL 1H-PYRROLO[3,2-B]PYRIDINE-2-CARBOXYLATE 1H-吡咯并[3,2-B]吡啶-2-羧酸甲酯 394223-19-9
Methyl 2-(cyanoMethyl)furan-3-carboxylate 2-氰基甲基-3-呋喃甲酸甲酯 59760-33-7
Methyl 2,2-diMethyl-3-hydroxypropionate 羥基*基乙酸甲酯 14002-80-3
METHYL 2,6-DIBROMOBENZOATE 873994-34-4
Methyl 2,6-dichloro-4-iodobenzoate 2,6-二氯-4-碘苯甲酸甲酯 1098619-73-8
Methyl 2,6-diisocyanatohexanoate 4460-02-0
METHYL 2-AMINO-3-CARBOXYBENZOATE 2-氨基-3-羧酸苯甲酸甲酯 253120-47-7
METHYL 2-AMINOTHIOPHENE-3-CARBOXYLATE 2-氨基噻吩-3-羧酸甲酯 4651-81-4
Methyl 2-Fluoroacrylate 2-氟丙烯酸甲酯 2343-89-7
Methyl 2-hydroxy-2-Methoxyacetate (MHMA) 2-羥基-2-甲氧基乙酸甲酯 19757-97-2
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
暫無(wú)信息 |