hFOB 1.19SV40 轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)hFOB 1.19SV40 轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
OCTAFLUOROTETRAHYDROFURAN 八氟代四氫呋喃 773-14-8
N-Boc-cyclohexane-1,2-diaMine 1-N-Boc-1,2-環(huán)己二胺 317595-54-3
MidazolaM hydrochloride 鹽酸* 59467-96-8
Midodrine 米多君 42794-76-3
MilbeMycin A3 密滅汀A3 51596-20-2
MilbeMectin A4 密滅汀A4 51596-11-3
MilbeMycin oxiMe 米爾貝肟 129496-10-2
Min 二十二烯酸 1002-96-6
METHYL 2-HYDROXY-4-NITROBENZOATE 13684-28-1
Methyl 3-(chlorosulfonyl)propanoate 3-(氯磺?;┍峒柞?nbsp;15441-07-3
Methyl 3-(Methoxycarbonyl)-7-oxo-9-azabicyclo[3.3.1]nonane-9-acetate 3-甲氧羰基-7-氧代-9-氮雜二環(huán)[3,3,1]壬烷-9-乙酸甲酯 125483-28-5
Methyl-3,5-dihydroxybenzoate 3,5-二羥基苯甲酸甲酯 2150-44-9
Methyl 3-aMino-4-hydroxybenzoate 3-氨基-4-羥基苯甲酸甲酯 536-25-4
Methyl 3-aMino-4-Methylbenzoate 3-氨基-4-甲基苯甲酸甲酯 18595-18-1
Methyl 3-aMino-5-(trifluoroMethyl)benzoate 3-氨基-5-三氟甲基苯甲酸甲酯 22235-25-2
Methyl 3-aMino-5-broMothiophene-2-carboxylate 甲基3 - 氨基-5 - 溴-2 - 羧酸 107818-55-3
METHYL ALPHA-CHLOROACRYLATE 甲基氯代丙酸酯 80-63-7
METHYL BROMOACETATE-2,2-D2 溴乙酸甲酯-D2 163886-16-6
METHYL CIS-1-BOC-4-HYDROXY-D-PROLINATE 順式-1-BOC-4-羥基-D-*甲酯 114676-69-6
Methyl cyclopentenolone 甲基環(huán)戊烯醇酮 80-71-7
Methyl dihydrogen phosphate 812-00-0
Methyl Ester L-Lysine Diisocyanate (S)-2,6-二異氰酸基己酸 34050-00-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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