SW579人甲狀腺癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)SW579人甲狀腺癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
ETHOPROPAZINE 乙丙嗪 522-00-9
ETHOXY PROPANOL 1-乙氧基-2-丙醇 1569-02-4
Ethoxyquin 乙氧基喹啉 91-53-2
ETHOXYLATED C11-C16 ALCOHOL 127036-24-2
Ethyl dihydrogen phosphate 磷酸單乙基酯 1623-14-9
Ethyl lactate 乳酸乙酯 97-64-3
Ethyl (chloroForMyl)acetate (氯甲酰基)乙酸乙酯 33142-21-1
Ethyl 1H-pyrazole-3-carboxylate 3-乙氧羰基吡唑 5932-27-4
ETHYL 2-(3-AMINO-4-HYDROXYPHENYL)ACETATE 86818-19-1
Ethyl 2-(ethoxyMethylene)acetoacetate 2-乙氧亞甲基乙酰乙酸乙酯 3788-94-1
Ethyl 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-1-thio-D-galactopyranose 2,3,4,6-O-四乙?;?1-硫代-Β-D-乙基半乳糖苷 55722-49-1
Ethyl 2,3,4,-tri-O-benzyl-L-thiofucosepyranosid 116391-11-8
ETHYL 2,5-DIMETHYL-1-PHENYL-1H-PYRROLE-3-CARBOXYLATE 76546-68-4
ETHYL 2-AMINO-2-CYANOACETATE OXALATE H2O 32683-02-6
ETHYL 2-AMINOINDOLE-3-CARBOXYLATE 2-氨基吲哚-3-羧酸乙酯 6433-72-3
Ethyl 2-AMinonicotinate 2-氨基*乙酯 13362-26-0
ETHYL 2-BROMO-2-PHENYLPROPANOATE 55004-59-6
ETHYL 2-CHLOROPYRIMIDINE-5-CARBOXYLATE 2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯 89793-12-4
ETHYL 2-CYANOBUTANOATE 2-氰基丁酸乙酯 1619-58-5
ethyl 2-cyclopropylpyriMidine-5-carboxylate 2-環(huán)丙基-5-嘧啶羧酸乙酯 648423-77-2
ETHYL 2-HYDROXYPYRIMIDINE-4-CARBOXYLATE 2-羥基嘧啶-4-羧酸乙酯 306961-02-4
ETHYL 3-AMINOCROTONATE 3-氨基巴豆酸乙酯 626-34-6
ETHYL 3-BROMOPYRIDINE-4-CARBOXYLATE 乙基3-溴吡啶-4-甲酸酯 13959-01-8
Ethyl 3-ethoxy-3-iMinopropionate hydrochloride 成色劑N-201 2318-25-4
Ethyl 3-ethoxybut-2-enoate 3-乙氧基-2-丁炔羧酸乙酯 998-91-4
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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