OS-RC-2腎癌細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)OS-RC-2腎癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2,6-difluoro-N-Methylaniline 55847-14-8
2,6-Difluorophenylhydrazine 2,6-二氟苯肼 119452-66-3
2,6-diisopropyl naphtalene 2,6-二異丙基萘 24157-81-1
2,6-diMethyl-4-hydroxy pyridine 2,6-二甲基-4-羥基吡啶 13603-44-6
2-[(Chlorocarbonyl)oxy]ethyl acrylate 41892-42-6
2'3'-Dideoxycytidine 5'-triphosphate sodiuM salt (ddCTP) 132619-66-0
2'3'-Dideoxyguanosine 5'-triphosphate sodiuM salt (ddTGTP) 2',3'-二脫氧鳥苷-5-三* 68726-28-3
25 g 四正己基高氯酸銨 4656-81-9
25000bls 1322-06-1
250-500Mg 2-(二苯基甲氧基)-N-甲基乙胺 17471-10-2
DIPHENHYDRAMINE N-OXIDE 3922-74-5
AlagebriuM chloride 4,5-二甲基-3-(2-氧代-2-苯基乙基)噻唑氯化物 341028-37-3
25-100g 7081-50-7
25-50 g 3-氰甲基苯甲酸 5689-33-8
5-diethylaMino-2-nitrosophenol hydrochloride 5-二乙基呋喃氯酸 25953-06-4
25g [2-(6-氯-3-噠嗪基)-2-氮雜乙烯基]二甲胺 35053-55-5
25g 2-溴咔唑 3652-90-2
25g 乙烯基四甲基二硅氧烷 55967-52-7
2-5g 2-氧代-1,2-二氫吡啶-3-基氨基甲酸芐酯 147269-67-8
25g and 50g 4-羥基噠嗪 20733-10-2
25-HYDROXYCHOLESTEROL 5-膽甾烯-3Β,25-二醇 2140-46-7
FERROUS SULFATE HEPTAHYDRATE, USP * 7782-63-0
25Mg 98% 676-39-1
25Mg 98% 73536-71-7
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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