786-O [786-0]腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)786-O [786-0]腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞786-O [786-0]腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2-ACETYLOXIRANE 4401-11-0
2-ADAMANTANECARBONYL-ARG-PHE-NH2 TRIFLUOROACETATE 2-ADAMANTANECARBONYL-ARG-PHE-NH2 876310-60-0
2-ALLYLOXYETHYL ACRYLATE 7784-80-7
2-aMinio-N-MethylbenzaMide
2-aMi,3-diMethoxypropane 2-氨基-1,3-二甲氧基丙烷 78531-29-0
2-AMi,9-dihydro-9-[(1S,3R,4S)-4-(benzyloxy)-3-(benzyloxyMethyl)-2-Methylenecyclopentyl]-6H-purin-6-one (interMediate 7) 2-氨基-1,9-二氫-9-[(1S,3R,4S)-4-芐氧基-3-芐氧基甲基-2-亞甲基環(huán)戊基]-6H-嘌呤-6-酮 142217-81-0
2-AMi-broMonaphthalene 20191-75-7
2-AMino-2-(furan-3-yl)acetic acid 2-氨基-2-(呋喃-3-基)乙酸 53845-43-5
2-AMino-2-Fluorobenzaldehyde 2-氨基-4-氟苯甲醛 152367-89-0
2-aMino-3-(1H-pyrrol-2-yl)propanoic acid 吡咯-2-* 3078-36-2
2-AMINO-3,5-DICHLOROPYRAZINE 2-氨基-3,5-二氯吡嗪 873-42-7
2-AMino-3-broMo-6-Methylpyridine 2-氨基-3-溴-6-甲基吡啶 126325-46-0
2-Fluoro-5-(trifluoroMethyl)-3-pyridinaMine 2-氨基-3-氯-5-三氟甲基吡啶 72600-65-8
2-aMino-3-fluorobenzoic acid 2-氨基-3-氟苯甲酸 825-22-9
2-AMino-3-fluorobenzotrifluoride 2-氨基-3-氟三氟甲苯 144851-61-6
2-AMino-3-pyridinecarboxaldehyde 2-氨基-3-吡啶甲醛 7521-41-7
tetraethylene glycol diglycidyl ether 17626-93-6
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
2,3-Pentanedione,4-Methyl- 7493-58-5
2,3-Piperidinedicarboxylicacid, (2R,3S)-rel- 哌啶-2,3-二羧酸 46026-75-9
2,3-PyrazinediaMine 2,3-二氨基哌嗪 13134-31-1
2,3-PyridinediaMine 2,3-二氨基吡啶 452-58-4
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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