COLO-320結(jié)腸腺癌細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)COLO-320結(jié)腸腺癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2,4,6-TRINITROANILINE 苦基胺 489-98-5
2-Chloro-1,3,5-trinitrobenzene 2,4,6-三硝基氯代苯(0309限出口) 88-88-0
2,6-Di-tert-butyl-4-Methylphenol 抗氧劑264 128-37-0
2,6-Dichloro-4-pyridinyl Methanol 2,6-二氯吡啶-4-甲醇 101990-69-6
2,6-Dichloro-5-fluoropyridine-3-carboxaldehyde 1260758-33-5
2,6-Dichloroacetophenone 2',6'-二氯苯乙酮 2040/5/3
2,6-Dichlorobenzoxazole 2,6-二氯苯并噁唑 3621-82-7
2,6-Dichloronitrobenzene 2,6-二氯硝基苯 601-88-7
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
2-(P-METHOXYBENZYL) AMINOPYRIMIDINE 6957-21-7
2-(PROPYL-3,3,3-D3)PENTANOIC-5,5,5-D3 ACID 87745-18-4
2-(p-tolyl)-p-benzoquinone 30237-07-1
2-(pyrroli din-1-yl)ethanaMine dihydrochloride 1-(2-氨乙基)吡咯烷 7154-73-6
2-(quinolin-7-yl)acetic acid 2-(喹啉-7-基)乙酸 152149-07-0
alpha-keto adipic acid 18294-85-4
2-(TRIBUTYLSTANNYL)BENZOXAZOLE 2-(三丁基錫)苯并惡唑 105494-68-6
2-(TrichloroMethyl)pyridine 2-(三氯甲基)吡啶 4377-37-1
2-(TrifluoroMethyl)propene 2-(三氟甲基)丙烯 374-00-5
2-(trifluoroMethyl)styrene 鄰三氟甲基苯乙烯 395-45-9
2-TriMethylsiloxy-1,3-butadiene 2-*基硅氧基-1,3-丁二烯 38053-91-7
2-(TriMethylsilyl)ethoxyMethyl chloride 2-(*基硅烷基)乙氧甲基氯 76513-69-4
2,6-DibroMoanthraquinone 2,6-二溴蒽醌 633-70-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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