A172膠質(zhì)母細胞瘤細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)A172膠質(zhì)母細胞瘤細胞 :
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2-AcetylaMinoisonicotinic acid 2-乙酰基氨基異* 54221-95-3
saMple size 626-53-9
2,4,6-trichloro-5-fluoropyriMidine 2,4,6-三氯-5-氟嘧啶 6693/8/9
2,4,6-TRICHLOROPHENYL CHLOROTHIONOFORMATE 31836-18-7
2,4,6-Trihydroxy-1,3-diMethyl benzene 二甲基均苯三酚 4463/2/9
2,1,3-Benzoxadiazole-5-carbaldehyde 2,1,3-苯并氧二唑-5-縮醛 32863-33-5
2,2'-(P-TOLYLIMINO)DIETHANOL N,N-二羥乙基-對甲基苯胺 3077/12/1
2,2',2''-[10-(2-hydroxypropyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7-triyl]triacetic acid 120041-08-9
2,2',2''-Nitrilotriacetonitrile 2,2',2''-氮川三乙腈 7327-60-8
2,2,2-trichloro-1-(2-chlorophenyl)-1-(4-chlorophenyl)ethanol 2,4'-三氯殺螨醇 10606-46-9
2,2,2-Trichloroethyl dichlorophosphate 18868-46-7
2,2,2-trifluoro-1-(4-iodo-phenyl)-ethanone 23516-84-9
2,2,2-TRIFLUORO-1,1-DIMETHYL-ETHYLAMINE 812-18-0
2,2,2-TRIFLUOROETHYL ACRYLATE 丙烯酸三氟乙酯 407-47-6
2,2,2-TRIFLUORO-N-(2,2,2-TRIFLUORO-1-TRIFLUOROMETHYL-ETHYLIDENE)-ACETAMIDE 52225-57-7
2,2,3,3,3-PENTAFLUOROPROPYL ACRYLATE 2,2,3,3,3-五氟丙基丙烯酸酯 356-86-5
2,2,3,3-TETRAMETHYLCYCLOPROPANECARBOXAMIDE 55265-53-7
2,2,4,4,6,8,8-HeptaMethylnonane 2,2,4,4,6,8,8-七甲基壬烷 4390/4/9
2,2,4,4-TetraMethyltetrahydrofuran 3358-28-9
2,2,5,5-TETRAMETHYLTETRAHYDROFURAN 2,2,5,5-四甲基四氫呋喃 15045-43-9
2,2,5-triMethyl- 4-cyclohepten-1-one 19822-67-4
2,2,6,6-TetraMethyl-4-piperidinol 四甲基哌啶醇 2403-88-5
2,2,6-triMethyl-4H-1,3-dioxin-4-one 2,2,6-*基-4H-1,3-二英-4-酮 5394-63-8
2,2':6',2''-TERPYRIDINE α,α,α-三聯(lián)吡啶 1148-79-4
2,2':6',2''-TERPYRIDINE-4'-CARBALDEHYDE 2,2':6',2''-三聯(lián)吡啶-4'-甲醛 108295-45-0
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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