LS 174T結(jié)腸腺癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)LS 174T結(jié)腸腺癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2-AcetaMido-5-aMinobenzenesulfonicacid 6973/5/3
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
1-Penten-4-yn-3-ol 14304-27-9
1-Pentyl-3-(1-naphthoyl)indole 1-戊基-3-(1-萘甲?;┻胚?nbsp;209414-07-3
1-phenethylpiperidine 332-14-9
1-Phenyl-2-propyn-1-one 1-苯基-2-丙炔-1-酮 3623-15-2
1-phenyl-ethyl-benzene 1,1-二苯基乙烷 612-00-0
1-Phenylpyrrolidin-3-aMine 1-苯基吡咯烷-3-胺 18471-41-5
1-PIPERAZINEETHANOL,4-ETHYL-(7CI,8CI,9CI) 3221-25-8
4-hydroxy-3,3-diMethyl-1-piperidinecarboxylic acid tert-butyl ester 143306-65-4
2′-AMino-2′-deoxyguanosine 2'-氨基-2'-脫氧鳥苷 60966-26-9
2'-C-METHYLGUANOSINE 2'-C-甲基鳥苷 374750-30-8
2-(1-AZIRIDINYL)-ETHYL METHACRYLATE 6498-81-3
dipyrroMethane 2,2'-二吡咯基甲烷 21211-65-4
2-(2-(Methylthio)pyriMidin-4-yl)Malonaldehyde 2-(2-甲硫基嘧啶-4-基)丙二醛 77168-37-7
2-(2,2-Diphenylacetyl)-1H-indene-1,3(2H)-dione ion(1-) sodiuM salt (1:1) 敵鼠鈉 42721-99-3
2-(2-aMinoethyl)-1-Methylpyrrolidine N-甲基-2-(2-氨乙基)-吡咯烷 51387-90-7
2-(2-AMinoethylaMino)ethanol 羥乙基乙二胺 111-41-1
2-(2-broMoethyl)-1,3-dioxolane 2-(2-溴乙基)-1,3-二惡烷 18742-02-4
2-(2-Butyl)-4-{4-[4-(4-Methyloxy-phenyl)-piperazin-1-yl]-phenyl}-2,4-dihydro-[1,2,4]-triazol-3-one 2,4-二氫-4-[4-[4-(4-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]苯基]-2-(1-甲基丙基)-3H-1,2,4-三唑-3-酮 252964-68-4
2-(2-Chloroethoxy)acetaMide 2-(2-氯乙氧基)乙酰胺 36961-64-5
2-CHLOROETHOXY ACETIC ACID 2-(2-氯乙氧基)乙酸 14869-41-1
2-(2H-Benzotriazol-2-yl)-6-(1-Methyl-1-phenylethyl)-4-(1,1,3,3-tetraMethylbutyl)phenol 紫外線吸收劑-928 73936-91-1
2-(2-Hydroxy-4-octyloxyphenyl)-[2H]-benzotriazole *, 2-(2H-苯并三氮唑-2-基)-5-(辛氧基)- 3147-77-1
2-(2-hydroxyethoxy)ethyl acetate 一縮二乙二醇單乙酯 2093-20-1
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
暫無信息 |