Tca-8113舌鱗癌細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)Tca-8113舌鱗癌細胞 :
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞 ,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
(6S,8R)-8-Hydroxy-1,4-diazabicyclo-[4.3.0]nonane 1161000-19-6
(6β)-3-(1-Methyl-1H-tetrazole-5-ylthioMethyl)-7α-aMino-7-Methoxy-8-oxo-5-oxa-1-azabicyclo[4.2.0]octa-2-ene-2-carboxylic acid benzhydryl ester (6R,7R)-7-AMINO-7-METHOXY-3-[(1-METHYL-1H-TETRAZOL-5-YLTHIO)METHYL]-8-OXO-5-OXA-1-AZABICYCLO[4.2.0]OCT-2-ENE-2-CARBOXYLIC ACID DIPHENYLMETHYL ESTER 66510-99-4
(7aR)-tetrahydro-1H-Pyrrolo[1,2-c]iMidazole-1,3(2H)-dione 214066-57-6
(8alpha,9S)-6'-Methoxycinchonan-9-ol 572-60-1
(all-Z)-6,9,12,15,18-Heneicosapentaenoic Acid Ethyl Ester 131775-86-5
(alphaS)-alpha-[[(1,1-DiMethylethoxy)carbonyl]aMino]-3-hydroxytricyclo[3.3.1.13,7]decane-1-acetic acid N-叔丁氧羰基-3-羥基-1-金剛烷基-D-* 361442-00-4
(alphaS)-alpha-AMino-3-hydroxytricyclo[3.3.1.13,7]decane-1-acetic acid 3-羥基-1-金剛烷基-D-* 709031-29-8
(C2H3Cl)M(C2H2Cl2)n 氯乳液 9011/6/7
(carboxyMethyl)diMethyl-3-[(1-oxododecyl)aMino]propylaMMoniuM hydroxide 月桂酰胺丙基甜菜堿 4292/10/8
D-Arg6,Azagly10)-LHRH II (D-ARG6,AZAGLY10)-LHRH II (HUMAN, CHICKEN) 335380-72-8
Prothipendyl hydrochloride 異THIPENDYL 1225-65-6
(E)-1-broMo-2-(2-broMovinyl)benzene
(E)-3-Methyl-2-phenyl-8-(prop-1-enyl) -4H-1-benzopyran-4-one (E)-3-甲基-2-苯基-8-(丙-1-烯基)-4H-苯并吡喃-4-酮 97070-55-8
(E)-BETA-FARNESENE (E)-7,11-二甲基-3-亞甲基-1,6,10-十二碳三烯 18794-84-8
(E)-Ethyl 4-BroMo-3-Methyl-2-butenoate 51371-55-2
(E)-PYRIMINOBAC-METHYL (E)- 嘧草醚 147411-69-6
(ethanaMine,2-(2-((2-chloroethyl)sulfonyl)ethoxy)-, hydrochloride 2-氯乙基砜乙氧基乙胺鹽酸鹽 98231-71-1
Tetradecanoic Acid 32112-52-0
(Isoquinolin-6-yl)MethanaMine 1053655-94-9
7-(AMinoMethyl)isoquinoline 95 1053655-96-1
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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