HCC 94 [HCC941122]子宮鱗癌細(xì)胞高分化 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)HCC 94 [HCC941122]子宮鱗癌細(xì)胞高分化:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞HCC 94 [HCC941122]子宮鱗癌細(xì)胞高分化,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
(6-(DIMETHYLAMINO)PYRIDIN-3-YL)METHANOL 6-(二甲氨基)-3-吡啶甲醇 20173-74-4
(6-BROMO-2-PYRIDINYL)-CARBAMIC ACID,1,1-DIMETHYLETHYL ESTER 6-溴-2-吡啶-氨基甲酸-1,1-二甲基乙基酯 344331-90-4
2-BroMo-6-(hydroxyMethyl)pyridine 6-溴吡啶-2-甲醇 33674-96-3
(6-Methylpyridin-2-yl)MethanaMine 6-甲基-2-吡啶甲胺 6627-60-7
Benzhydryl (6R,7R)-3-hydroxy-8-oxo-7-[(2-phenylacetyl)aMino]-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylate (6R,7R)-3-羥基-8-氧代-7-[(苯基乙?;┌被鵠-5-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸二苯基甲酯 54639-48-4
(6S)-6-(diMethylaMino)-4,4-diphenylheptan-3-one 5653-80-5
(6S,2S)-diaMinopiMelic acid 14289-34-0
METHYLAZOXY METHANOL ACETATE 592-62-1
Molybdate(2-),dioxodithioxo-, diaMMoniuM, (T-4)- (9CI) 16150-60-0
(Nitrilotri-4,1-phenylene)trisboronic acid 三苯基胺-4,4',4"-三硼酸 245737-33-1
(R)-(-)-1-AMINOETHYL-PHOSPHONIC ACID (R)-(1-氨基乙基)膦酸 60687-36-7
(R)-(-)-1-AMINOINDAN (R)-(-)-1-氨基茚滿 10277-74-4
(R)-(-)-2-(2,5-Dihydrophenyl)glycine (R)-(-)-2-(2,5-二氫苯基)* 26774-88-9
(R)-(-)-2-AMINOBUT* HYDROCHLORIDE (R)-(–)-2-氨基丁酰胺鹽酸鹽 103765-03-3
(R)-(-)-3-Pyrrolidinol hydrochloride (R)-3-羥基吡咯烷鹽酸鹽 104706-47-0
(R)-(?)-Glycidyl benzyl ether (R)-芐氧甲基環(huán)氧乙烷 14618-80-5
(R)-2-Methylbutanol (R)-2-甲基丁醇 616-16-0
(R)-(+)-1,2-Dithiolane-3-pentanoic acid R-(+)-* 1200-22-2
(R)-(+)-1-AMi-phenylpropaneHCl (R)-(+)-1-苯丙胺鹽酸鹽 19068-33-8
(R)-(+)-1-Boc-3-aMinopyrrolidine (R)-1-Boc-3-氨基吡咯烷 147081-49-0
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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