293 [HEK-293] 人胚腎細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)293 [HEK-293] 人胚腎細(xì)胞 :
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞293 [HEK-293] 人胚腎細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
THORIUM NITRATE pentahydrate 14767-04-5
THORIUM NITRATE HYDRATE 硝酸釷水合物 13823-29-5
threo-Guaiacylglycerol beta-coniferyl ether (1R,2R)-1-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-2-[4-[(1E)-3-羥基-1-丙烯-1-基]-2-甲氧基苯氧基]-1,3-丙二醇 869799-76-8
thujane 側(cè)柏烷 471-12-5
Thunberginol C THUNBERGINOL C 147517-06-4
ThyMeleatoxin 94482-56-1
THYMIDINE-3',5'-DIPHOSPHATE, DISODIUM SALT 108322-12-9
THYMINE-BETA-D-ARABINOFURANOSIDE 1-Β-D-阿拉伯呋喃糖苷胸腺嘧啶 605-23-2
THYMOLPHTHALEIN MONOPHOSPHATE MAGNESIUM SALT 10496-54-5
ThyMolphthalein Monophosphoric acid, MagnesiuM salt 百里*單磷酸鎂鹽 35106-21-9
ThyMoModulin 胸腺調(diào)節(jié)素 90803-92-2
THYMOPENTIN * 69558-55-0
TiaMulin 泰妙菌素 55297-95-5
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
talaMpicillin hydrochloride 39878-70-1
Talaporfin 他拉卟吩 110230-98-3
Talinolol 他林洛爾 57460-41-0
Tall oil rosins 8052/10/6
TANDUTINIB N,BETA,BETA-*基-L-苯基丙氨?;?N-[(1S,2E)-3-羧基-1-(1-甲基乙基)-2-丁烯基]-N,3-二甲基-L-纈氨酰胺 228266-40-8
TaMarind seed Polysaccharide 羅望子膠 39386-78-2
TaMsulosin 坦索羅辛 106133-20-4
TANTALUM SILICIDE 硅化鉭 12039-79-1
Taraxasterol TARAXASTEROL 1059-14-9
taraxerol 蒲公英萜醇 127-22-0
Tarenflurbil * 51543-40-9
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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