HBL-100整合SV40 基因的乳腺上皮細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體HBL-100整合SV40 基因的乳腺上皮細胞 ):
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌 細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Thiocyanic acid 硫氰酸 463-56-9
Thiofluorescein 25319-73-7
ThioisonicotinaMide 硫代異* 2196-13-6
triMethylthioacetic S-acid 硫代特戊酸 55561-02-9
THIOREDOXIN 52500-60-4
Thioridazine 硫利達嗪 50-52-2
TARIQUIDAR N-[2-[[4-[2-(6,7-二甲氧基-3,4-二氫-1H-異喹啉-2-基)乙基]苯基]氨基甲?;鵠-4,5-二甲氧基苯基]喹啉-3-甲酰胺 206873-63-4
TasisulaM 他斯索蘭 519055-62-0
Taspoglutide 他司魯泰 275371-94-3
TautoMycetin 119757-73-2
TAXIFOLIN 紫杉葉素 480-18-2
Tazanolast 他扎司特 82989-25-1
Tazarotene * 118292-40-3
T-BUTYL 4-BROMOBUTYRATE 4-溴丁基叔丁酯 110661-91-1
TCS 21311 1260181-14-3
TriethanolaMine 85% 三乙醇胺 102-71-6
TEA.3HF 三乙胺三氫氟酸鹽 73602-61-6
TebipeneM 泰比培南 161715-21-5
Tebuconazole 戊唑醇 107534-96-3
TecloftalaM Shiragen 葉枯酞 76280-91-6
TecoviriMat 特考韋瑞 816458-31-8
Teduglutide 替度魯肽 197922-42-2
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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