CGM1EB 病毒轉(zhuǎn)化的B 細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體CGM1EB 病毒轉(zhuǎn)化的B 細(xì)胞):
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Misartan * 144701-48-4
Misartan Methyl ester *甲酯 528560-93-2
TeMocillin 替莫西林 66148-78-5
TeMoporfin 替莫卟吩 122341-38-2
TeMozoloMide * 85622-93-1
teMozoloMide acid 97% 3,4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑并[5,1-D]-1,2,3,5-四嗪-8-甲酰胺酸 113942-30-6
Teneligliptin 特力利汀 760937-92-6
tenonitrozole 替諾尼唑 3810-35-3
Teprenone * 6809-52-5
Terbinafine-d7 Hydrochloride 1185240-27-0
Terconazole 曲康唑 67915-31-5
Ternidazole 特硝唑 1077-93-6
Terpineol 松油醇 8000-41-7
tert-AMyl hydroperoxide 特戊基過氧化氫 3425-61-4
TERT-AMYL METHYL ETHER 叔戊基甲基醚 994-05-8
tert-Butyl (1S,4S)-2,5-diazabicyclo[2.2.1]heptane-2-carboxylate (1S,4S)-2-BOC-2,5-二氮雙環(huán)[2.2.1]庚烷 113451-59-5
TERT-BUTYL (4-FLUORO-3-PYRROLIDINYL)CARBAMATE (4-氟-3-吡咯烷基)氨基甲酸叔丁酯 351369-12-5
TERT-BUTYL (R)-2-HYDROXYBUTYRATE 110171-06-7
TERT-BUTYL [4-(CHLOROSULFONYL)PHENYL]CARBAMATE N-BOC對(duì)氨基苯磺酰氯 269747-25-3
Tert-butyl 1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-7-ylcarbaMate 1,2,3,4-四氫異喹啉-7-氨基甲酸叔丁酯 885270-54-2
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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