3T6-Swiss albino胚胎成纖維細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)3T6-Swiss albino胚胎成纖維細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Pyridoxal-5-phosphate Monohydrate 5-磷酸吡哆醛 41468-25-1
Pyridoxal phosphate 磷酸吡哆醛 54-47-7
pyridoxine phosphate 447-05-2
PYRIMIDIN-4-YL-METHANOL 4-羥甲基嘧啶 33581-98-5
PyriMidine 嘧啶 289-95-2
PyriMidine, 2-chloro-5-(1-Methylethyl)- (9CI) 2-氯-5-異丙基嘧啶 596114-50-0
PYRIMIDINE-2-BORONIC ACID PINACOL ESTER 937593-41-4
Pyrocatecholphthalein 596-28-1
pyroMellitic dianhydride glycerol diMethacrylate adduct 148019-46-9
Tris(tetrabutylaMMoniuM) hydrogen pyrophosphate 三(四丁基銨)氫焦磷酸鉀鹽 76947-02-9
Pyrraline 74509-14-1
PYRROLE-2-ACETIC ACID 97 吡咯-2-乙酸 79673-53-3
Pyrrolidine 四氫吡咯 123-75-1
Pyrrolidine, 2-ethynyl- 853304-19-5
Pyrrolidine-2,4-dione 2,4-吡咯烷二酮 37772-89-7
pyrrolidine-2-ethanol 2-(吡咯烷-2-基)乙醇 19432-88-3
Pyrrolo[2,3-b]indol-3a(1H)-ol,2,3,8,8a-tetrahydro-1-Methyl-, (3aR,8aS)- 101053-34-3
QUASSIN 苦木素 76-78-8
QUAZEPAM CIV 夸西泮 36735-22-5
Quercetin 3-O-robinobioside 槲皮素 3-O-洋槐糖苷 52525-35-6
quercetin-3-rutinoside 蘆丁 153-18-4
quercetin-3-vicianoside 23284-18-6
Quetiapine fuMarate 富馬酸* 111974-72-2
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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