PA317成纖維細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)PA317成纖維細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Sebacic acid MonoMethyl ester 癸二酸單甲酯 818-88-2
Sec. Alkane sulphonate-Na salt 石油磺酸鈉,烷基磺酸鈉 85711-69-9
sec-butyl forMate 589-40-2
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
PROPIOIN 4-羥基-3-己酮 4984-85-4
propioMazine 丙酰馬嗪 362-29-8
PROPIONANILIDE N-苯丙醯胺 620-71-3
Pyridine-4-boronic acid 吡啶-4-硼酸 1692-15-5
Pyrido[1,2-a]benziMidazole-2,8-diaMine (9CI) 152403-50-4
Pyrido[2,3-d]pyriMidine, 4-chloro-1,5,6,7-tetrahydro- 4-氯-1,5,6,7-四氫-吡啶[2,3-D]嘧啶 3771-95-7
Pyrido[3,4-d]pyriMidin-4(1H)-one,2,3-dihydro-2-thioxo- 2,3-二氫-2-硫代-[3,4-D]苯并嘧啶-4(1H)-酮 412341-42-5
Pyrido[3,4-d]pyriMidin-4(3H)-one 3,4-二氫吡啶[3,4-D]嘧啶-4-酮 19178-25-7
Pyridoxal 5′-phosphate hydrate 3-羥基-2-甲基-5-磷酰氧甲基-4-吡啶甲醛 853645-22-4
Quifenadine 芬卡醇 10447-39-9
Quinacainol 喹那卡諾 86024-64-8
QuinapyraMine 喹匹拉明 20493-41-8
QUININE SULFATE SALT MONOHYDRATE 303137-00-0
Quinolin-2-ylMethanaMine 2-喹啉甲胺 5760-20-3
Quinoline, 7-Methoxy-4-[(6-phenyl-1,2,4-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-yl)Methoxy]- 7-甲氧基-4-[(6-苯基-1,2,4-三唑并[4,3-B]噠嗪-3-基)甲氧基]喹啉 1002304-34-8
Quinoline,2-(chloroMethyl)-6-Methyl 2-(氯甲基)-6-甲基喹啉 22989-38-4
Quinoline,2-broMo-6-Methoxy- 2-溴-6-甲氧基喹啉 476161-59-8
Quinoline-2,4-diol 2,4-二羥基喹啉 86-95-3
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過(guò)1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過(guò)夜。第二天放入液氮中。
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