HCCLM3肝癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)HCCLM3肝癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Fluorescein SodiuM * 518-47-8
FLUORESCENT YELLOW AA223 2-(7-二乙基氨基)-2-氧代-2H-1-苯并吡喃-3-基)-5-苯并惡唑亞磺酰胺 68427-35-0
Fluorine 氟 7782-41-4
SODIUM FLUOROACETATE 62-74-8
FLUOROL YELLOW 088 2,8-二甲基-萘并[3,2,1-KL]占噸 81-37-8
Fluoxastrobin {2-[6-(2-氯苯氧基)-5-氟嘧啶-4-基氧]苯基}(5,6-二氫-1,4,2-二噁嗪-3-基)甲酮O-甲基肟 193740-76-0
Flupirtine 氟吡汀 56995-20-1
Flupirtine Maleate 馬來酸氟吡汀 75507-68-5
Fluroxypyr 氯氟吡氧乙酸 69377-81-7
Fluticasone Furoate 397864-44-7
Fluvastatin N-Ethyl SodiuM Salt (Fluvastatin IMpurity) 93936-64-2
FMoc-9-aMino-4,7-dioxanonanoic acid FMOC-11-氨基-3,6,9-三氧雜十一酸 139338-72-0
FMOC-ARG(ALOC)2-OH FMOC-ARG(ALOC)2-OH 148893-34-9
FMOC-ARG(BOC)2-OH N-芴甲氧羰基-N',N''-二叔丁氧羰基-L-* 143824-77-5
FMOC-Arg(Pbf)-OH Fmoc-Pbf-* 154445-77-9
FMoc-Cys-(pMeBzl)-OH N-芴甲氧羰基-S-(4-甲基芐基)-L-半* 136050-67-4
FMoc-D-2-Nal-OH Fmoc-3-(2-萘基)-D-* 138774-94-4
FMOC-D-ARG(BOC)2-OH N-[(9H-芴-9-基甲基)羰基]-N',N''-二[叔丁氧羰基]-D-* 214852-34-3
FMOC-GLU(OCHX)-OH (2S)-5-(環(huán)己氧基)-2-[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]-5-氧代戊酸 150047-85-1
FMoc-Glu-Obzl FMOC-L-*-Α-芐酯 122350-52-1
FMOC-HIS(BOC)-OH FMOC-BOC-* 81379-52-4
FMOC-L-PHE(4-CH2-SO3H) 206060-45-9
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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