TT人甲狀腺癌細(xì)胞上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級(jí)胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級(jí)胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)TT人甲狀腺癌細(xì)胞:
(1) 收集1×106個(gè)細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min 。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個(gè)細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測(cè)即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個(gè)細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測(cè)。
(7)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光值,每管計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測(cè)樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時(shí)。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
FMoc-Lys-(cl-Z)-OH Fmoc-(2-氯芐氧基羰基)賴氨酸 133970-31-7
FMOC-NH-(PEG)2-COOH 916585-44-9
FMoc-NH-dPEG8-COOH 756526-02-0
fMoc-O-tert-butyl-L-hydroxyproline Fmoc-4-叔丁氧基-L-* 122996-47-8
FMOC-SER(GALNAC(AC)3-ALPHA-D)-OH N-芴甲氧羰基-O-BETA-(2-乙酰氨基-2-脫氧-3,4,6-三-O-乙?;?ALPHA-D-吡喃半乳糖基)-L-* 120173-57-1
FMOC-TRANS-4-FLUORO-PRO-OH 203866-20-0
FMOC-TYR(TBU)-SER(PSI-ME,MEPRO)-OH 878797-09-2
Folic Acid(VitaMin M or V) * 59-30-3
Fondaparinux SodiuM 磺達(dá)肝癸鈉 114870-03-0
Forchlorfenuron 氯吡脲 68157-60-8
ForMaldehyde 甲醛 50-00-0
ForMaldehyde, polyMer with (chloroMethyl)oxirane, 4,4-(1-Methylethylidene)bisphenol and phenol 40216-08-8
FORMAMIDINE HYDROCHLORIDE 甲脒鹽酸鹽 6313-33-3
FORMIC ACID LITHIUM SALT 甲酸鋰鹽 556-63-8
FORMIC-13C ACID 1633-56-3
ForMoterol FuMarate 富馬酸* 43229-80-7
ForMyl acetate 甲乙酐 2258-42-6
FORSKOLIN, 7-DEACETYL-7-O-HEMISUCCINYL- 福斯高林7-O-半琥珀酰-7-脫乙?;?nbsp;83797-56-2
Foscarnet SodiuM * 63585-09-1
英文名稱 中文名稱 CAS號(hào)
ethanon2-Acetyl-1-pyrroline 85213-22-5
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時(shí)間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時(shí)。不能超過1小時(shí)。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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